论文部分内容阅读
目的1.分析中国东南部人群脊髓小脑性共济失调各基因亚型的频率分布。2.分析中国东南部人群脊髓小脑性共济失调各基因亚型的临床资料。方法1.利用聚合酶连反应结合琼脂糖凝胶电泳或变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法对SCA1、2、3、6、7、12、17及DRPLA进行基因分析。2.利用DNA测序检测CAG重复数。结果1.SCA3的频率为72.5%(100/138),SCA1、6、7及DRPLA的频率分别均为为0.7%(1/138),没有检测到SCA2、12及17的异常扩增。2.三个临床诊断为复杂型常染色体显性遗传性痉挛性截瘫的家系经基因分析证实为SCA3家系。3.检测到一个携带189个CAG重复的婴儿期发病的SCA7病例。4.检测到一个携带63个CAG重复的DRPLA病例。结论1.SCA各亚型的频率分布的差异与种群及同地域相关。2.对AD-HSP患者需进行SCA3基因筛查。3.首次报道经基因分析证实的婴儿期发病的中国SCA7病例且数据提示未合并多器官损害的病例的生存期高于合并多器官损害的病例。4.首次报道经基因分析证实的中国大陆DRPLA家系。目的1.探讨在PCR扩增Machado-Joseph病的异常片段时,LA Taq DNA聚合酶及Taq DNA聚合酶之间的反应效率的差异。2.制备一种全新的CAG重复梯度作为DNA size marker并检测该重复梯度在变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时的分辨率。3.检测中国Machado-Joseph病患者在脊髓小脑性共济失调患者中的相对发病率。4.检测中国汉族人群野生型染色体ATXN3的CAG重复分布特征。5 .研究同ATXN3的CAG重复序列紧密连锁的三个单核苷酸多态——A669TG/G669TG、C987GG/G987GG及TAA1118/TAC1118的基因型及单倍体型。6.重新界定ATXN3的CAG重复范围。方法1.在相同的反应条件及反应体系下,分别使用LA Taq DNA聚合酶及Taq DNA聚合酶扩增12名MJD患者的异常片段以比较二者的扩增效率。2.采用基因重组结合PCR的方法进行CAG重复梯度的制备并检测其在PAGE中的分辨率。3.利用PCR结合PAGE的方法对138名无亲缘关系的SCA家系的先证者及1003名无亲缘关系的中国汉族正常个体的正常及异常的片段进行扩增检测,PCR使用的是对高GC含量的序列更加敏感的LA Taq DNA聚合酶。4.利用位点特异性PCR结合琼脂糖凝胶电泳或PACE及PCR结合单链构象多态性分析的方法对94名正常个体和30例MJD患者的SNP基因型及单倍体型进行检测。结果1.在使用LA Taq DNA聚合酶进行PCR时,所有12名MJD患者的异常片段都被扩增出,而使用Taq DNA聚合酶进行PCR时却只有2名MJD患者的异常片段被扩增出。2.CAG重复梯度含有有32种不同CAG重复数的片段,重复数分别为13、14、18-43、45、46、48及49,这些片段在8%变性聚丙烯酰胺凝胶上可以清晰分辨。3.MJD在SCA中的发病率为72.5%,显著高于之前报道的有关中国人及其他亚洲人群的相关数据,在世界范围内也仅次于葡萄牙及巴西人群。4.在1003名个体的2006条野生型染色体中,CAG的重复范围为13-49,其中有4条染色体的CAG重复数分别为46、48、48及49,这是首次在野生型染色体中发现携带中间片段的染色体,大的正常片段的比率为0.28,其为迄今报道的最高的比率。5.所有扩增片段都具有相同的单倍体型ACA且此单倍体型在大的正常片段组的比率显著高于非大的正常片段组。结论1.在中国东南部人群中,MJD的相对发病率非常高,可能的原因为在PCR时使用了对高GC含量的序列更加敏感的LA Taq DNA聚合酶及大的正常片段的比率非常高。2.利用CAG重复梯度同PAGE相结合检测ATXN3的CAG重复具有具有准确、简单、安全、价格低廉等优点。3.在中国汉族人群中大的正常片段同MJD密切相关,在大的正常片段基础上可能产生ATXN3的新发突变。4.ATXN3的CAG重复范围重新界定为:正常片段≤44、45≤中间片段≤49、异常片段≥50个CAG重复。