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目的:宫颈癌的转移是影响其预后最重要的因素之一,其常见的转移方式包括直接蔓延、淋巴结转移及血行转移。数据表明,4.16%-7.7%宫颈癌患者因血行转移发生肺转移。相比于局部宫颈癌患者,转移性宫颈癌患者的五年生存率明显降低,仅为16.5%。手术是一种可为转移性宫颈癌患者提供生存优势的治疗方法,但会受到患者肺肿瘤结节数量、大小及患者自身情况（如淋巴结转移有无）的影响,其中肺肿瘤结节数少于两个的患者经手术切除后有更明显的生存优势。但手术后需要进一步化疗改善患者的预后。消融治疗或者放化疗联合的治疗方式虽可一定程度上延长患者的生存期,但其产生的副作用明显影响患者的生存质量。因此,开发一种安全有效的治疗宫颈癌转移瘤的方式势在必行。治疗性人乳头瘤状病毒（Human papillomavirus,HPV）疫苗作为一种全新的宫颈癌治疗或辅助治疗模式,旨在重建机体特异性的免疫应答,有效阻止肿瘤的恶性进展,抑制转移肿瘤的生长,改善患者的生存质量,延长患者的生存期。课题组前期实验证实了以非甲基化Cp G寡脱氧核苷酸（Oligodeoxynucleotides,ODN）为佐剂的HPV多肽疫苗能有效诱导皮下移植宫颈癌和宫颈原位肿瘤模型小鼠产生细胞免疫应答,降低系统及肿瘤局部免疫抑制细胞的数量,减少肿瘤局部血管的生成,进而抑制皮下移植肿瘤及宫颈原位肿瘤的生长。本研究应用宫颈癌肺转移模型小鼠,深入探讨皮下接种该疫苗是否能控制肺转移瘤的形成和进展,以及疫苗发挥作用的免疫机制。本研究结果将为宫颈癌转移瘤患者提供一种全新的治疗模式或辅助治疗模式。研究方法:1.多肽的合成。HPV 16 E7 43-77多肽由35个氨基酸组成,序列为GQAEPDRAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQSTHVDIR。多肽纯度>95%。2.小鼠宫颈癌肺转移模型的构建以及免疫接种。尾静脉注射HPV 16 E6、E7、Ras基因转化的TC-1细胞构建小鼠宫颈癌肺转移模型。6-8周的雌性C57BL/6小鼠随机分为4组,每组6只,分别为PBS对照组,Cp G ODN组,E7多肽组,疫苗组（Cp G ODN联合E7多肽组）,并且分别注射对应的试剂（PBS:0.1ml/只;Cp G ODN:20μg/只;E7多肽:50μg/只;疫苗组:20μg Cp G ODN+50μg E7多肽/只）。在模型建立的4天,11天,18天通过皮下注射给予模型小鼠共三次免疫接种。3.评估疫苗对小鼠肺转移瘤的作用效果。每隔两天称量小鼠的体重,观察小鼠的状态。收集第30天的小鼠肺组织,计数小鼠肺肿瘤结节数量,称量肺组织重量,初步评估该疫苗对小鼠宫颈癌肺转移瘤的抗肿瘤效果。4.检测疫苗对肺组织中CD4+、CD8+T细胞的影响。收集第30天的小鼠肺组织,流式细胞术检测肺组织中CD4+T细胞和CD8+T细胞的数量。5.检测疫苗对肺组织中MDSCs、TAMs和Tregs免疫抑制细胞的影响。收集第30天的小鼠肺组织,流式细胞术检测肺组织中MDSCs（CD11b+Gr-1+）、TAMs（CD11b+F4/80+）和Tregs（CD4+Foxp3+）细胞的数量。6.检测疫苗对肺组织中的细胞因子、趋化因子和基质金属酶表达水平的影响。收集第30天的小鼠肺组织,通过实时荧光定量PCR检测细胞因子（IFN-γ、IL-10）、趋化因子（CCL2、3、5、12、19、CXCL-1、CXCL-8）和基质金属酶（MMP2、3、7、9）的m RNA水平。7.验证疫苗对肺组织中浸润的CD4+、CD8+T细胞的影响,同时检测该疫苗对肺组织中肿瘤细胞增殖和p53表达水平的影响。收集第30天的小鼠肺组织,免疫组织化学染色技术检测CD4+、CD8+T细胞,检测Ki67和p53的表达情况。8.统计学分析。应用Graph Pad Prism软件进行统计学分析。实验数据以均值±标准差表示。采用One-Way ANOVA中的Tukey多重比较检验,P<0.05表示有统计学差异。结果:1.疫苗对小鼠宫颈癌肺转移瘤的抑制作用。与PBS组相比,疫苗组的肺肿瘤结节数量及肺组织重量显著降低。Cp G ODN组的肺肿瘤结节数量也有明显下降。HPV 16 E7多肽组没有明显变化。2.疫苗可增加肺组织中CD4+、CD8+T细胞的浸润。疫苗组的CD4+T细胞百分比和CD8+T细胞百分比较PBS组和单独E7多肽组均有明显升高。与PBS组相比,单独Cp G ODN组CD4+、CD8+T细胞的百分比有所增加,E7多肽组CD8+T细胞的百分比有所增加,但差异无统计学意义。3.疫苗对肺组织中MDSCs、TAMs和Tregs免疫抑制细胞的影响。与PBS组相比,单独Cp G ODN组、单独E7多肽组和疫苗组MDSCs的百分比下降均有显著的统计学意义。单独E7多肽、疫苗组TAMs百分比较PBS组有明显下降,但两组间差异无统计学意义。各组间Tregs百分比没有明显差异。4.疫苗对肺组织中的细胞因子、趋化因子和基质金属酶m RNA水平的影响。与PBS组相比,疫苗组的IFN-γm RNA水平显著升高,IL-10、CCL2、3、5、12、19、CXCL-1、CXCL-8和MMP2、3、7、9的m RNA水平明显降低。Cp G ODN和E7多肽组的各个指标表达情况有所不同。5.疫苗对肺组织中浸润的CD4+、CD8+T细胞、肿瘤细胞增殖和p53表达的影响。与PBS组和E7多肽组相比,疫苗组浸润的CD4+T细胞和CD8+T细胞明显增加。单独Cp G ODN组和疫苗组Ki67和p53表达明显下降。结论:1.皮下接种疫苗可抑制宫颈癌肺转移瘤的生长。2.疫苗接种可增加肺组织中CD4+T细胞和CD8+T细胞的浸润;减少MDSCs和TAMs的浸润。3.疫苗接种可改变肺组织中多种细胞因子、趋化因子和MMPs的表达水平。