目的:探索胍丁胺(AGM)对酵母多糖(ZYM)诱导急性小鼠腹膜炎炎性损伤的保护效应及其相关机制。方法:1、将72只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(18只,腹腔注入磷酸盐缓冲液)、ZYM模型组(18只,腹腔注入1mg/ml的酵母多糖溶液0.5ml)、AGM干预组(18只,腹腔注入1mg/ml的酵母多糖溶液0.5ml和胍丁胺溶液400mg/kg)和AGM对照组(18只,腹腔注入胍丁胺溶液400mg/kg),各组分别于建模后2h、6h、24h处死6只小鼠,采集外周血、腹腔灌洗液、肝组织。在处死小鼠前定时察看小鼠精神活动状态。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清、腹腔灌洗液及肝匀浆中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、角化细胞来源趋化因子(KC)、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)含量;血细胞计数板计数腹腔灌洗液中浸润炎性细胞总数;流式细胞术分析腹腔浸润的PMN比例;全自动生物化学分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、肌酐(Crea)、尿素氮(Urea)浓度。2、分离小鼠骨髓PMN和腹腔原代巨噬细胞,分别培养于Transwell小室的上下室,ZYM刺激下室的腹腔巨噬细胞,在加或不加胍丁胺干预的情况下,在40分钟后用dapi染色,倒置荧光显微镜下察看各组pmn趋化数目。3、分离并体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,采用100μg/ml的酵母多糖溶液刺激,在agm治疗的情况下,于不同时间点收集细胞蛋白及细胞培养上清。elisa检测细胞上清中tnf-α、il-6、kc、mip-2蛋白的浓度,逆转录pcr(qpcr)检测细胞中tnf-α、il-6、kc、mip-2mrna的表达量,免疫印迹法(westernblot)检测胞浆胞核中inos、p65、p-p65的表达水平。此外,分别应用n-甲基d-天冬氨酸受体(nmda-r)拮抗剂mk-801、α2肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾(yhb)、咪唑啉1受体(i1-r)高亲和力配基依法克生(efa)及咪唑啉2受体(i2-r)高亲和力配基咪唑克生(ida)预作用巨噬细胞,有或无胍丁胺治疗的条件下,检测zym刺激12h后培养上清中il-6、kc的浓度。结果:1、在酵母多糖攻击2h、6h、24h后zym模型组和agm治疗组小鼠均表现出行动缓慢,反应迟钝,蜷缩成团,腹泻,饮食减少,且随着时间推移症状愈发明显,但agm干预组小鼠精神和活动状态明显好于zym模型组。与对照组比较,agm治疗可显著降低zym刺激2h后小鼠血清中趋化因子kc(pg/ml:1578.8±107.3比2077.4±196.3,p<0.05)、mip-2(pg/ml:743.5±77.9比937.6±89.6,p<0.05)的浓度和腹腔灌洗液中趋化因子kc(pg/ml:6064.3±577.4比9864.7±851.8,p<0.05)、mip-2(pg/ml:1763.4±125.7比2369.7±304.5,p<0.05)的浓度;降低zym攻击6h后小鼠血清中tnf-α(pg/ml:513.7±38.5比822.1±47.8,p<0.05)、il-6(pg/ml:945.4±107.9比1326.4±178.5,p<0.05)的浓度和腹腔灌洗液中炎症因子tnf-α(pg/ml:1661.7±185.4比2812.5±216.4,p<0.05)、il-6(pg/ml:11694.1±1503.2比21170.7±3872.4,p<0.05)的含量以及腹腔灌洗液中白细胞总数(×106/ml:10.1±1.2比14.7±1.1,p<0.05)和中性粒细胞比例(百分比%:77.83%比90.07%,p<0.05);削弱zym攻击24h后肝组织匀浆中tnf-α(ng/g:281.6±20.8比358.5±25.3,p<0.05)和il-6(ng/g:197.4±22.7比273.5±26.7,p<0.05)、趋化因子kc(ng/g:47.2±11.9比77.4±20.3,p<0.05)和mip-2(ng/g:67.4±14.6比103.7±19.2,p<0.05)的升高(均p<0.05);降低zym刺激24h后血清中alt(u/l:392.6±41.4比712.3±55.5,p<0.05)、ast(u/l:494.7±34.3比681.7±38.6,p<0.05)、urea(mmol/l:31.3±1.8比46.8±3.9,p<0.05)、crea(μmol/l:32.5±1.9比38.2±2.7,p<0.05)的浓度。2、在体外transwell趋化实验中我们发现,zym组巨噬细胞上清诱导的pmn趋化数目与对照组相比显著增多,但zym+agm组巨噬细胞培养上清诱导的pmn迁移趋化数目与zym组相比极大减少。3、在体外小鼠腹腔原代巨噬细胞培养实验中,采用zym刺激原代巨噬细胞并经agm治疗发现,细胞tnf-α、il-6、kc、mip-2的蛋白释放量和mrna合成量均大大降低,且细胞中inos表达量减少,p65磷酸化和入核受到抑制。此外,zym作用小鼠原代腹腔巨噬细胞12h后,agm、mk-801、ida处理均能抑制巨噬细胞培养上清中il-6、kc的上升,其中mk-801抗炎效果弱于agm,agm与mk-801联用有一定程度的联合抗炎效果,而IDA的抗炎效果与AGM类似,且AGM与IDA联用时联合抗炎效果不明显;YHB、EFA无抑制炎症效果,并对AGM的抗炎效应亦无影响。结论:1、AGM能降低ZYM引起的腹膜炎小鼠血清和腹腔灌洗液中TNF-α、IL-6及趋化因子KC、MIP-2的生成,降低腹腔炎性细胞总数及抑制腹腔PMN的浸润,表明AGM有着良好的全身与局部抗炎作用。2、AGM能降低ZYM诱导腹膜炎小鼠血清中ALT、AST、Urea、Crea的升高,减轻肝脏中炎症因子和趋化因子表达水平,表明AGM对腹膜炎小鼠脏器功能损害有一定的保护作用。3、AGM能减少ZYM体外刺激下小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-6、KC、MIP-2的蛋白释放量和mRNA生成量,抑制iNOS的表达,减弱p65的磷酸化与入核,且AGM的抗炎效应与IDA相似,与MK-801的抗炎效果差异明显,与YHB、EFA无关,表明AGM能通过抑制巨噬细胞iNOS表达,NF-κB信号通路活化,以及激活咪唑啉2受体等途径发挥抗炎作用。