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目的：穿膜肽即细胞膜穿透肽，是一类能穿透细胞膜或核膜的短肽。早期穿膜肽对细胞的识别缺乏特异性，因而在抗肿瘤治疗应用中大大被限制。噬菌体展示技术是一项用来筛选特定蛋白质或多肽的技术，其方法是将外源蛋白质或多肽展示在噬菌体表面，其对应的编码基因整合在噬菌体基因组中。本实验根据肿瘤细胞表面分子的特异性，运用噬菌体展示技术，旨在筛选出小鼠黑色素瘤细胞特异性穿膜肽，从而为恶性黑色素瘤的靶向治疗寻求更简便而有效的方法。 方法：(1)以小鼠黑色素瘤细胞为目的细胞，将已导入外源基因的噬菌体库与小鼠黑色素瘤细胞进行孵育-洗脱-扩增，循环筛选4-6次，对筛选出的噬菌体DNA进行序列测定，获取其外源插入序列，将插入序列进行比对、分析，初步获得能特异性结合小鼠黑色素瘤细胞的短肽，将其命名为MT23。(2)分别合成带有荧光标记的MT23-FITC、TAT-FITC、NCO-FITC短肽，将这些短肽与多种细胞体外共孵育，荧光显微镜观察或荧光酶标仪定量分析各细胞内的荧光分布，并比较不同条件下细胞内荧光量的变化。(3)通过乳酸脱氢酶释放实验检测细胞膜穿透肽对细胞膜完整性的影响，通过MTT检测细胞膜穿透肽对细胞增殖的影响。(4)构建Apoptin、MT23-Apoptin原核表达质粒，酶切验证正确后转化大肠杆菌表达载体诱导表达Apoptin、MT23-Apoptin融合蛋白，经尿素洗脱、复性后Western blot法检测蛋白的正确性。(5)TUNEL法检测Apoptin、MT23-Apoptin融合蛋白体外诱导小鼠黑色素瘤细胞凋亡的生物学活性。 结果：(1)通过噬菌体展示技术，成功筛选出特异性结合B16细胞的含肽噬菌体并确定了其插入的外源DNA序列。(2)合成了带有荧光FITC标记的细胞膜穿透肽，将这些肽处理各组细胞珠后，实验组中B16细胞内有明显的荧光分布，而其它细胞内未见荧光或荧光极少。(3)MT23并不影响细胞膜的完整性，对细胞的增殖也影响极小。(4)成功构建出Apoptin、MT23-Apoptin原核表达质粒，诱导表达并纯化蛋白，且经Western blot法检测纯化的蛋白均正确。(5)MT23-Apoptin融合蛋白能够诱导B16细胞凋亡，而单独的Apoptin蛋白不能诱导细胞的凋亡。 结论:运用噬菌体展示技术可以成功筛选出小鼠黑色素瘤细胞特异性穿膜肽，并经过荧光验证其具有良好的特异性穿膜效应，细胞膜穿透肽对细胞膜的完整性并不影响，此外细胞膜穿透肽可携带Apoptin进入小鼠黑色素瘤细胞发挥诱导细胞凋亡的生物活性。本实验为黑色素瘤的靶向治疗提供了新的思路和方法，为有效治疗黑色素瘤积累了经验。