siRNA沉默TGFBR2基因对HepG2细胞增殖的影响

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目的:通过siRNA干扰技术研究TGFBR2基因沉默对肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响,初步探讨TGFBR2对肝癌细胞的增殖和侵袭的作用,为肝癌的基因靶向治疗提供初步的理论依据。方法:设计3种针对TGFBR2基因的siRNA片段,以脂质体lipo2000为媒介将其转染进HepG2细胞中;通过real-time PCR检测手段筛选出沉默效率最高的siRNA片段,并将对应的DNA序列插入到pEGFP-N3质粒中,再将质粒转化到JM109菌体内进行克隆;提取重组质粒并将其转染到HepG2细胞中,通过Western blot检测TGFBR2蛋白表达水平。先用不同浓度的TGF-β1细胞因子刺激正常HepG2细胞,观察细胞增殖情况并筛选最佳TGF-β1浓度。再用TGF-β1刺激siRNA重组质粒干扰后的HepG2细胞,对比干扰前后细胞增殖的变化。结果:在3种siRNA片段中,以siRNA-1对TGFBR2基因的沉默效率最高。与空白对照组比较,5ng/mL的TGF-β1即可显著抑制HepG2细胞的增殖(P<0.05),并且与高浓度的10ng/mLTGF-β1组无差异(P>0.05)。用5ng/mL的TGF-β1刺激HepG2细胞,与blank组和siRNA-NC组比较,siRNA-1组细胞增殖加快(P<0.05),但仍低于未加TGF-β1细胞因子的正常HepG2细胞(P<0.05)。结论:通过siRNA干扰技术沉默TGFBR2基因后,可减弱TGF-β1信号传导通路对HepG2肝癌细胞株的抑制作用,导致肿瘤细胞的增殖加快。
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