降解柠檬苦素菌株的筛选鉴定及组学分析

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  (1)对多年生橘园的土壤样品和发酵的醋醅进行富集培养后,通过平板筛选,得到8株能够以柠檬苦素为单一碳源生长的菌株,对菌株摇瓶复筛,得到3株降解能力较好的菌株,通过形态学和分子生物学,鉴定1号菌株为纤维菌属,2号和3号菌株为苍白杆菌属。
  (2)对3株菌的培养条件做单因素试验,选择优势降解3号菌株构建响应面模型,发现3号菌株柠檬苦素降解率的最佳工艺为:pH为3.5,温度为30℃,氮源为硝酸铵,菌接种量为3×108CFU/mL。在此条件下,测得柠檬苦素降解率为78.90%,是优化前的2.1倍。
  (3)通过IlluminaNovaSeq和PacbioSequel平台对3号菌株进行全基因组分析,发现该菌株总基因组长度为1,250,615,224bp,由两条环状的染色体和两条环状的质粒组成。通过IlluminaHiSeq测序平台进行转录组测序,并以全基因组为参考,分析表达差异基因主要涉及2,4-二烯酰辅酶A还原酶(NADPH)活性、内肽酶调节活性、催化活性的负调节、酶抑制剂活性、谷氨酸氨连接酶活性、3-甲基-2-氧代丁酸脱氢酶(2-甲基丙酰基转移)活性、氧化还原酶活性、丙酮酸-乙酰辅酶A活性、异柠檬酸裂解酶活性等生物学过程。表达差异基因主要涉及氧化磷酸化(ko00190)、丙酮酸代谢(ko00620)、丙酸酯代谢(ko00640)、精氨酸和脯氨酸代谢(ko00330)、乙醛酸和二羧酸酯的代谢(ko00630)等代谢途径。
  (4)通过LC-MS技术分析代谢产物,发现代谢通路主要为柠檬酸盐循环(TCA循环)、柠檬烯的降解代谢、维生素代谢(烟酸酯和烟酰胺代谢、泛酸和CoA生物合成)、氨基酸代谢(丙氨酸,赖氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢)等代谢途径。
  (5)对转录本和代谢物联合分析原核生物的固碳途径,推测可能存在二氧代戊二酸酯到异柠檬酸盐,再到柠檬酸盐代谢终产物的过程。
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