脉络膜新生血管(Choroidal Neovascularization，CNV)是导致年龄相关性黄斑变性(AMD)失明的主要原因，而AMD是发达国家55岁以上人群不可逆性致盲的首要原因。随着我国人口老龄化趋势的加快以及人均寿命的延长，AMD已经成为我国老年人中主要致盲疾病之一。目前对AMD的发病机制尚不明确，治疗手段极其有限。随着分子生物学研究水平的提高和对免疫炎症组分认识的深入，有学者提出炎症在CNV的形成过程中扮演着重要角色。鉴于炎症在CNV的形成与发展过程中发挥的重要作用，我们将具有我国自主知识产权的抗炎新药99Tc—MDP(商品名：云克)应用于激光诱导的CNV小鼠动物模型，了解99Tc—MDP对CNV的形成是否具有抑制作用，对促进血管生成最重要的细胞因子VEGF(血管内皮生长因子)进行定量研究，并研究不同剂量的99Tc—MDP对视网膜是否具有毒性作用。本课题通过研究抗炎来抑制CNV形成，为有效治疗AMD开辟了一个新的途径。 第一部分 99Tc—MDP抑制激光诱导的C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管效应及对VEGF蛋白表达影响的研究. 目的：观察不同剂量的99Tc—MDP对小鼠脉络膜新生血管是否具有抑制效应，并对影响血管生成的重要因子VEGF蛋白进行定量检测。 方法：将鼠龄为6-8周大的74只C57BL/6J小鼠按照随机化原则分成4组，分别为生理盐水对照组(n=19)、低剂量组(n＝19)、中剂量组(n=18)和高剂量组(n＝18)。使用倍频Nd：YAG激光光凝建立C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管模型，激光光凝后每天分别予以腹腔注射99Tc—MDP0.5×10-1μg/kg(低剂量组)、1×10-1μg/kg(中剂量组)、2×10-1μg/kg(高剂量组)和等体积的生理盐水(生理盐水对照组)。激光光凝后第7天通过心脏灌注高分子量的FITC-Dextran后摘取眼球，行RPE-脉络膜铺片，用荧光显微镜观察并拍照记录小鼠CNV的形成情况。使用IPP生物学软件对各实验组的CNV面积进行计算并进行统计学分析。另取26只小鼠于激光光凝后第三天摘取眼球，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各实验组RPE—脉络膜组织VEGF蛋白的表达情况。 结果：各实验组脉络膜新生血管面积如下：生理盐水对照组：9372.37±3670.42μ㎡，低剂量组：6004.47±1880.73μ㎡，中剂量组：3647.86±1865.52μ㎡，高剂量组：3440.67±2473.34μ㎡，呈剂量依赖的抑制效应。与生理盐水对照组相比较，低剂量组对CNV的抑制率达35.93％，中剂量组和高剂量组能够显著抑制CNV的生成，其抑制百分率分别达到达61.08％和63.29％。各实验组RPE—脉络膜组织VEGF的表达量为(各实验组已平均到每mg总蛋白中VEGF蛋白的含量)生理盐水对照组：107.04±23.22ng/mg总蛋白，低剂量组：78.56±17.23ng/mg总蛋白，中剂量组：69.33±9.06ng/mg总蛋白，高剂量组：60.72±16.37ng/mg总蛋白，各腹腔注药组(低、中、高剂量组)的VEGF表达量与生理盐水对照组有统计学差异(P<0.05)。 结论：通过腹腔注射99Tc—MDP能够抑制VEGF蛋白的表达并抑制CNV的形成。 第二部分 不同剂量的99Tc—MDP对C57BL/6J小鼠视网膜毒性的研究 目的：观察不同剂量的99Tc—MDP对C57BL/6J小鼠视网膜是否具有毒性作用。 方法：将鼠龄为6-8周大的48只C57BL/6J小鼠随机分为四组，低剂量组、中剂量组、高剂量组和生理盐水对照组，每天予以腹腔注射99Tc—MDP0.5×10-1μg/kg、1×10-1μg/kg、2×10-1μg/kg和等体积的生理盐水，于注射后第3天、第7天、第14天和第28天每组各处死3只小鼠，其中2只小鼠眼球用作HE染色组织学切片，观察视网膜各层组织结构是否有改变，另外一只小鼠用于透射电镜检查，观察视网膜组织各层的超微结构是否有改变，特别是视杆细胞和视锥细胞是否发生形态学的改变，评估不同剂量的99Tc—MDP对视网膜是否具有毒性作用。 结果：比较腹腔注药后四个时间点(3天、7天、14天和28天)，HE染色组织切片发现生理盐水组、低剂量组、中剂量组和高剂量组四个实验组的视网膜各层组织完整，未见细胞结构的改变，亦未见各层组织厚度的改变。电镜检查表明视网膜各层的超微结构正常，视锥细胞和视杆细胞的内节、外节正常，线粒体、微管等结构清晰。 结论：HE染色组织学切片和透射电镜组织超微结构表明腹腔注射99Tc—MDP有效抑制CNV形成的剂量对视网膜没有毒性作用，是一个有希望用于治疗CNV的相对安全的药物。