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目的:通过探讨围产期间科尔沁牛外周血淋巴细胞HSP70的动态表达,揭示围产期免疫抑制状态下HSP70表达变化对免疫细胞功能调控作用,为科尔沁牛围产期免疫状态评价亦提供理论依据。 方法:选用科尔沁牛(2-3胎)10头,同期发情、配种,从中选5头受孕牛(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ),于分娩前14、7和2天(-14d、-7d、-2d)、分娩当天(0d)、分娩后2、7和14天(2d、7d、14d)颈静脉采血。分离血清,采用放射免疫的方法检测血清中GC含量;分离外周血内淋巴细胞,分别采用流式细胞分析技术、实时荧光PCR、WesternBlot法检测淋巴细胞周期分布变化,淋巴细胞内HSP70、GRαmRNA与HSP70、GR蛋白表达。 结果:1.淋巴细胞G0/G1期从-14d~0d受抑制比例逐渐降低,分娩后0d~14d逐渐恢复,0d时比例最低,差异显著(P<0.05);S期产前-14d~0d逐渐升高,产后0d~14d缓慢降低,0d时S期比例最高,与-14d、-7d、-2d、2d、7d、14d相比差异极显著(P<0.01);G2/M期与G0/G1期变化规律相同。PI%产前-14d~0d逐渐升高,产后0d~14d缓慢降低,0d时细胞增殖比例最高,差异显著(P<0.05)。 2.淋巴细胞内HSP70mRNA产前-14d~-2d,表达量逐渐减少,差异性显著(P<0.05),分娩后2d~14d,表达量升高,差异性显著(P<0.05),0d时表达量最低,与0d相比,-14d、-2d、2d、14d时表达量差异极显著(P<0.01)。淋巴细胞内HSP70表达与HSP70mRNA表达变化规律基本一致。 3.血清中GC含量从-14d~0d开始逐渐升高,分娩后0d~14d再逐渐降低,其中-2d~2d血清内GC含量变化明显,差异显著(P<0.05),0d时血清内GC含量最高,与0d相比,-14d、-2d、2d、14d时表达量差异极显著(P<0.01),-14d~-2d、2d~14d下降或升高趋势相对平缓。 4.淋巴细胞内GRαmRNA总的变化趋势是从-14d~0d逐渐升高,0d~14d再逐渐降低,差异显著(P<0.05),0d时表达量最高,与0d相比,-14d、-2d、2d、14d时表达量差异极显著(P<0.01)。GR蛋白表达规律与GRαmRNA表达量规律基本一致。 结论:本研究确立了科尔沁牛围产期淋巴细胞周期变化规律及细胞增殖比例。确立围产期科尔沁牛外周血血清中GC含量及淋巴细胞内HSP70、GRα表达的动态模式。