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乳房炎是国内外畜牧养殖业中最为常见的多发性疾病之一,会导致泌乳动物产奶量下降和乳成分及其理化性质等发生变化,从而降低乳制品的营养价值和经济价值,给畜牧养殖业带来巨大的经济损失。因此,本研究以正常与临床型乳房炎绵羊乳腺组织为试验材料,应用二维凝胶电泳、质谱鉴定与生物信息学等技术对正常与临床型乳房炎绵羊乳腺蛋白进行分析与鉴定;之后通过实时荧光定量PCR、免疫印迹及免疫组化的方法对筛选出的4个差异性表达的蛋白质进行验证,取得如下结果:1.绵羊乳腺蛋白质2-DE体系的建立与优化通过对不同上样量、不同聚焦时间、不同分离胶及不同规格pH胶条这四项参数进行化较与优化,建立一套适合于绵羊乳腺蛋白质分离的2-DE体系。结果表明:采用三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法,上样量600μg,聚焦时间90000 Vh或更高,17 cm pH 3-10胶条以及12%分离胶能够较好地分离绵羊乳腺蛋白质。2.正常与临床型乳房炎绵羊乳腺蛋白质组学研究基于优化与建立好的绵羊乳腺蛋白2-DE体系,采用二维凝胶电泳技术与质谱鉴定技术对正常与临床型乳房炎绵羊乳腺组织中的差异性蛋白质进行分离与鉴定,并进行生物信息分析。结果发现从临床型乳房炎绵羊乳腺凝胶图谱中共检测到63个差异性表达的蛋白点,其中37个蛋白点经质谱鉴定与数据库检索后,共发现30种蛋白质(18种蛋白质表达上调,12种蛋白质表达下调);GO聚类分析发现这些差异性蛋白质主要参与细胞、代谢、免疫、信号转导及生物调节等生理过程,主要涉及结合、分子结构活动、转运活动、催化活性等分子功能;KEGG富集分析发现这些差异性表达蛋白主要参与新陈代谢、遗传信息加工、环境信息加工、细胞过程和生物体系统等五大信号通路;蛋白互作网络分析发现14种差异性表达的蛋白质间有明显的互作关系。3.4个差异性表达蛋白质的验证通过实时荧光定量PCR和免疫印迹技术对正常与临床型乳房炎绵羊乳腺中的差异性蛋白质SOD2、ANXA2、ERp29与KRT10进行检测,结果表明SOD2、ERp29和KRT10蛋白在转录水平上的表达趋势与其2-DE中的研究结果均一致,ANXA2蛋白在转录水平上的表达趋势与其2-DE中的研究结果相反;SOD2、ANXA2、ERp29和KRT10蛋白在蛋白质水平上的表达趋势与其2-DE中的研究结果均一致。同时免疫组化法发现SOD2、ANXA2、ERp29和KRT10蛋白在正常与临床乳房炎绵羊乳腺组织中均表达,且均定位于乳腺上皮细胞。