目的:研究小鼠植入前胚中BRUNOL4蛋白的定位及mRNA表达,并通过显微注射BRUNOL4抗体观察小鼠植入前的发育,初步阐明BRUNOL4在小鼠植入前胚中的作用。方法:1.KM小鼠(♀KM×♂KM)合笼以获取不同时期的植入前胚,结合免疫荧光染色和激光共聚焦扫描显微观察BRUNOL4蛋白在小鼠植入前胚各阶段的表达。2.收集KM小鼠各阶段的植入前胚,利用Real-Time PCR技术观察Brunol4mRNA的表达水平。3.收集KM小鼠1-细胞胚(hCG后18h),置于KSOM培养液中预孵育3h后,选择具有明显雌、雄原核的植入前胚进行相应处理,分为以下3组:KSOM培养组(空白对照组)、无关IgG(100μg/ml)注射组(阴性对照组)和BRUNOL4抗体(100μg/ml)注射组,收集3组植入前胚进行体外培养,并观察后续发育情况。4.于hCG后50h收集3组发育至2-细胞胚的细胞,检测ZGA相关的标志基因MuERV-L、Zscan4d、Hsp70.1、eIF1A的mRNA表达情况。5.于hCG后96h收集3组发育至桑葚胚的细胞,检测干细胞转录因子Sox2、Oct4以及分化相关因子Cdx2基因表达的变化。结果:1.免疫荧光结果显示,在卵母细胞和植入前胚早期,BRUNOL4蛋白呈颗粒状弥散表达,在8-细胞胚阶段,其蛋白颗粒显著变粗,至桑葚胚阶段,BRUNOL4荧光强度达到最强,之后开始降低,在晚期囊胚阶段降到最低水平。2.Real-Time PCR检测结果显示,Brunol4 mRNA在成熟的卵母细胞(MII卵)中表达水平最高,受精后表达水平逐渐下降,8-细胞胚至囊胚阶段几乎检测不到。3.显微注射BRUNOL4抗体后,囊胚腔化率显著低于KSOM培养组(空白对照组)和无关IgG注射组(阴性对照组)(P<0.05)。4.显微注射BRUNOL4抗体后,各组2-细胞胚中四个ZGA相关标志基因eIF1A、MuERV-L、Zscan4d、Hsp70.1的mRNA表达水平均无显著差异(P>0.05)。5.显微注射BRUNOL4抗体后,桑葚胚中Sox2与Oct4 mRNA与对照组相比无显著差异,Cdx2 mRNA表达水平明显下降(P<0.05)。结论:BRUNOL4蛋白在小鼠植入前胚胞质内的阶段特异性表达提示其可能对植入前胚发育起到一定的作用。Brunol4 mRNA在成熟的卵母细胞(MII卵)中表达水平最高,提示其可能为母源效应基因。采用特异性抗体显微注射封闭BRUNOL4的功能后,四个ZGA相关标志基因eIF1A、MuERV-L、Zscan4d、Hsp70.1以及干细胞转录因子Sox2、Oct4的mRNA表达水平均无显著差异,但可引起桑葚胚内Cdx2 mRNA表达下调,提示BRUNOL4可能通过调控Cdx2的表达从而参与滋养层形成过程,进而影响囊胚的发育。