理脾复方制剂对厌食大鼠胃窦平滑肌脑肠肽LP、NPY、CCK-8的调控影响

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目的:通过理脾复方制剂对大鼠胃窦平滑肌细胞及厌食大鼠胃窦组织中脑肠肽瘦素(LP)、神经肽Y(NPY)、八肽胆囊收缩素(CCK-8)的调控影响,以探讨理脾复方制剂治疗厌食的作用机理和具体靶点,进一步深入揭示理脾复方制剂防治小儿厌食的理论基础和科学依据。方法:实验分两部分进行:(1)选取60只SPF级SD大鼠,雌雄各半,20~25日龄(体重50±10g)。随机分为细胞培养组,生理盐水组,理脾复方制剂低、中、高剂量组及硫酸锌组6组,每组10只。细胞培养组用于原代大鼠胃窦平滑肌细胞的分离培养,其余各组分别灌服生理盐水,低、中、高剂量理脾复方制剂和硫酸锌溶液,每日1次,连续7日,末次灌胃1小时后备制含药血清。①取各组含药血清稀释10%后,刺激大鼠胃窦平滑肌细胞,寻找细胞增殖最佳时间;②在细胞增殖最佳时间,通过RT-PCR和Western blot检测大鼠胃窦平滑肌细胞LP、NPY、CCK-8的mRNA和蛋白表达情况。(2)选取60只SPF级SD大鼠,雌雄各半,20~25日龄(体重50±10g)。随机分为正常组(10只)和模型组(50只),正常组予常规饲料喂养,模型组予特制饲料喂养制造厌食大鼠模型,造模成功后将模型组50只大鼠,雌雄各半,每组10只,随机分为:模型对照组、理脾复方制剂低、中、高剂量组和硫酸锌组。予正常组和模型对照组灌服生理盐水,其余各组分别灌服低、中、高剂量理脾复方制剂与硫酸锌药物干预;每日1次,连续7日,末次灌胃1小时后取胃窦组织,检测厌食大鼠胃窦组织LP、NPY、CCK-8的蛋白表达情况。结果:1.理脾复方制剂和硫酸锌含药血清均能促进大鼠胃窦平滑肌细胞的增殖,10%含药血清浓度中以理脾复方制剂高剂量组最佳。2.大鼠胃窦平滑肌细胞中均有LP、NPY、CCK-8的mRNA和蛋白表达。理脾复方制剂各组和硫酸锌组可上调大鼠胃窦平滑肌细胞LP、NPY的mRNA和蛋白表达,下调CCK-8的mRNA和蛋白表达,硫酸锌组和理脾复方制剂高剂量组优于其余各组。3.大鼠造模后进食量低于正常大鼠52.2%,体重低于26.1%。经干预后厌食大鼠的进食量和体重均增长,硫酸锌组与理脾复方制剂高剂量优于各组。4.厌食大鼠胃窦组织中LP、NPY、CCK-8的蛋白表达均低于正常组,各组药物干预后均能上调LP、NPY、CCK-8的蛋白表达,硫酸锌组和理脾复方制剂中剂量组优于其他各组。结论:1.生理状态下,脑肠肽LP、NPY、CCK-8的mRNA和蛋白在大鼠胃窦平滑肌细胞中均有表达。各组理脾复方制剂和硫酸锌含药血清对三种脑肠肽的mRNA和蛋白表达均有调控影响,以上调LP、NPY和下调CCK-8为主,理脾复方制剂中以高剂量组调控最佳,这可能是该制剂通过调控胃窦平滑肌细胞中脑肠肽变化,使食欲中枢促进摄食行为,发挥其“健脾助运”作用治疗厌食的机理之一。2.病理状态下,厌食大鼠胃窦组织LP、NPY、CCK-8的蛋白表达均降低,三种脑肠肽的表达紊乱可能与大鼠处于厌食的病理状态有关。经理脾复方制剂各组和硫酸锌干预后,厌食大鼠胃窦组织中LP、NPY、CCK-8的蛋白表达均有上调,以理脾复方制剂中剂量组最佳。这可能是理脾复方制剂治疗厌食的机理之一。
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