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猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae, Mhp)是引起猪支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae of swine,MPS)的主要病原,其致病机理为特异性的黏附于猪的呼吸道黏膜上皮组织,造成上皮细胞的病变或坏死,引发MPS的发生。本研究利用猪肺炎支原体强弱毒株体外感染猪呼吸道上皮细胞,从感染细胞的氧化损伤和差异表达蛋白两方面来分析猪肺炎支原体感染与宿主细胞应答过程中的相互关系。实验首先以猪肺炎支原体168株(强毒株)和168L株(弱毒株)体外感染猪肺泡上皮细胞(SJPL),通过对感染细胞进行NO检测,筛选感染时间和感染剂量,以此为条件,利用H202测定、间接免疫荧光(IFA)检测和DAPI染色验证细胞的氧化损伤程度及差异分析。结果显示,在感染时间为36h,感染剂量为5×106CCU时,强毒株感染细胞的NO浓度显著高于弱毒株(P<0.05),同时强弱毒都极显著高于对照组(P<0.01)；H202检测显示强弱毒株感染细胞后H202浓度显著高于对照(P<0.01),而且强弱毒株之间产生的H202浓度也存在显著性的差异(P<0.05)；IFA拍照可见强毒株在细胞上的黏附量高于弱毒株；DAPI染色表明强毒株对细胞造成的损伤程度也高于弱毒株。实验进一步利用猪肺炎支原体168强弱毒株体外感染猪气管上皮细胞(STEC),采用双向电泳技术(Two-dimensional Electrophoresis,2-DE)对感染细胞的全蛋白进行分离,运用PDQuestV8.0软件对强弱毒株全蛋白的蛋白点进行比对和表达量分析(T检验法,差异>1.5倍),获得表达差异点共16个,对其进行质谱分析,成功鉴定了11个蛋白点,其中5个表达上调,6个表达下调。在强毒感染细胞中,呈现5个蛋白表达上调,4个蛋白下调；弱毒感染细胞中,则只有1个上调,5个下调；强弱毒感染中同时出现上调的蛋白有1个,下调的有3个。从11个差异蛋白点中,选择甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)进行了Western blotting验证,结果显示,GAPDH蛋白在弱毒感染中有表达下调趋势,与双向电泳结果一致。通过对Mhp168强弱毒株感染细胞的氧化损伤检测,以及表达蛋白的差异分析,为深入探讨猪肺炎支原体致病机理以及以此为基础的早期诊断、疫苗和药物研究提供参考。