论文部分内容阅读
本文研究大黄鱼人工雌核发育诱导条件的优化,对胚胎发育进行连续观察,并利用微卫星标记对雌核发育一代和雌核发育二代的基因纯合度进行分析,通过建立减数分裂型人工雌核发育家系,研究了22个微卫星标记与着丝粒之间的遗传距离。主要结果如下:1.大黄鱼人工雌核发育二倍体诱导条件的优化。用不同剂量紫外线辐射过的精子诱导雌核发育,原肠期存活率和孵化率都呈现出明显的Hertwig效应。综合受精率、原肠期存活率、孵化率和初孵仔鱼形态正常率的观测结果,253800μw.cm-2– 406080μw.cm-2是用紫外线进行大黄鱼精子遗传失活的适宜照射剂量。对辐射持续时间、冷休克处理起始时间和持续时间进行3因素3水平正交试验的结果表明,大黄鱼减数分裂型雌核发育二倍体诱导的最适宜条件为紫外线辐射剂量355320μw.cm-2,授精后3 min开始冷休克,休克持续时间为10 min,在此条件下诱导率(形态正常二倍仔鱼的孵化率)可达到20%。2.利用微卫星标记分析了大黄鱼雌核发育一代(meio-G1)和雌核发育二代(meio-G2)的杂合度以及减数分裂型雌核发育的近交效应。对普通养殖群体(C)、雌核发育一代群体和雌核发育二代群体的6个微卫星位点进行了分析,共检测到21个等位基因。三群体等位基因数从多到少依次为C(21)>G1(20)>G2(13);雌核发育一代(G1)和二代(G2)的平均观测杂合度(HO)分别为0.195和0.031,均明显低于普通养殖群体(0.494),且G2平均观测杂合度比G1减少了84.1%,G1的实际近交系数为0.605,G2的实际近交系数为0.937。可见人工诱导雌核发育可导致基因快速地纯合,是快速建立大黄鱼遗传纯系的有效途径。3.利用筛选出来的22对母本基因型为杂合型的微卫星引物分别对两个减数分裂型雌核发育(meio-gynogenetic)一代家系和正常二倍体对照家系进行遗传分析。结果表明,两个雌核发育家系的雌核发育个体的比例分别为100%和96.9%;在所观察的22个微卫星标记位点中,4个位点的遗传偏离了孟德尔分离比;假设在完全干涉的条件下,余下的18个位点与着丝粒间的距离介于0～50cM之间,平均重组值y为0.586,近交系数为0.414,相当于全同胞近交系数的1.67倍。其中有10个微卫星标记的重组率大于0.667,说明大黄鱼减数分裂型雌核发育一代在这些位点上的等位基因存在高度重组的现象。