【摘 要】
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布鲁菌病是由布鲁菌引起的一种人畜共患病,以流产和发热为特征,严重威胁人类和许多动物的健康,同时也对畜牧业生产造成巨大损失。本研究以布鲁菌Rev.I株基因组为模板,扩增BAB
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布鲁菌病是由布鲁菌引起的一种人畜共患病,以流产和发热为特征,严重威胁人类和许多动物的健康,同时也对畜牧业生产造成巨大损失。本研究以布鲁菌Rev.I株基因组为模板,扩增BAB基因序列,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pET-30a-BAB,并进行原核表达、Western-Blot检测及其抗体的间接ELISA方法建立。结果表明:本试验成功克隆并表达了 BAB基因,经SDS-PAGE分析纯化后的表达产物显示,本研究获得较纯蛋白;Western-Blot试验表明,该基因表达蛋白可与布鲁菌羊阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性;随后,以BAB蛋白作为包被抗原,建立并优化了检测BAB抗体的间接ELISA方法。确定最佳包被条件为:BAB蛋白包被量0.25μg/mL,血清稀释度为1:400;封闭液为3%猪源明胶;二抗稀释度为1:6000;显色时间为10 min。通过对临床40份羊血清的检测,计算得出临界值为0.607。当待检血清OD450值大于等于0.607时,判定为阳性,反之则判定为阴性。建立的BAB间接ELISA方法与SAT及RBPT相比,总符合率达到77.5%。
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