骨髓干细胞移植治疗急慢性肝损伤的实验研究

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本实验首先采用密度梯度离心法联合贴壁培养分离、纯化及扩增培养鼠骨髓MSCs,流式细胞仪检测P3代MSCs表面标志,透射电镜观察MSCs超微结构。其次将扩增培养的P3代MSCs体外诱导向肝系细胞分化,诱导后7d、14d及21d采用RT-PCR、免疫细胞化学检测AFP、ALB、CK18及肝细胞抗原等肝系细胞的标志,电镜观察细胞超微结构的变化。并将诱导后向肝系细胞分化的细胞用荧光染料DAPI标记后,经脾移植于CCl4制造的小鼠急性肝损伤模型体内。且通过门静脉、尾静脉及脾脏途径移植于CCl4制造的大鼠慢性肝损伤模型体内。移植后通过血清学、病理学检测移植效果,探讨治疗急、慢性肝损伤的可行性,以及何种途径更有效率。结果显示MSCs强表达CD44、CD29,基本不表达CD34、CD45。MSCs超微结构良好,具有处于原始状态下细胞超微结构的特点。骨髓MSCs可在体外分化为具有肝系细胞表型和功能的细胞。门静脉、尾静脉及脾脏三种途径移植向肝系细胞诱导分化的骨髓MSCs,均可迁徙定位于肝脏,对急、慢性肝损伤具有修复作用,脾内移植途径优于门静脉及尾静脉。
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