【摘 要】
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目的制备大鼠肝脏脱细胞支架;构建循环灌注培养体系,将大鼠正常肝细胞（BRL细胞株）及大鼠骨髓源性内皮祖细胞种植于脱细胞支架内进行三维循环灌注培养,为构建血管化的组织工程肝提供实验基础。方法（1）采用灌注法制备大鼠肝脏脱细胞支架,HE染色、Masson染色、苦味酸-天狼星染色及I型胶原、IV型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白免疫组化检测脱细胞支架的结构及细胞外基质成分,扫描电镜观察脱细胞支架的超微结构
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目的制备大鼠肝脏脱细胞支架;构建循环灌注培养体系,将大鼠正常肝细胞（BRL细胞株）及大鼠骨髓源性内皮祖细胞种植于脱细胞支架内进行三维循环灌注培养,为构建血管化的组织工程肝提供实验基础。方法（1）采用灌注法制备大鼠肝脏脱细胞支架,HE染色、Masson染色、苦味酸-天狼星染色及I型胶原、IV型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白免疫组化检测脱细胞支架的结构及细胞外基质成分,扫描电镜观察脱细胞支架的超微结构,DNA含量检测脱细胞的效果;ELISA检测GAG的含量;CCK-8检测脱细胞支架的细胞毒性;异种动物体内移植检测生物相容性。（2）构建循环灌注培养体系;采用经门静脉途径和包膜直接注射两种方法将BRL细胞种植于脱细胞支架内,行循环灌注培养,检测培养基中总蛋白和总胆汁酸含量;HE染色、扫描电镜和ALB免疫荧光观察细胞在支架内的生长情况。（3）原代培养大鼠骨髓源性内皮祖细胞,并通过CD31、CD133免疫荧光、摄取DiI-ac-LDL和结合FITC-UEA鉴定;采用经门静脉途径将内皮祖细胞种植于脱细胞支架内,行循环灌注培养,HE染色和CD31免疫荧光检测内皮祖细胞在支架内的生长情况。结果（1）采用灌注法获得大鼠肝脏脱细胞支架,组织学染色未见细胞成分;免疫组化显示I型胶原、IV型胶原、纤维连接蛋白及层粘连蛋白等细胞外基质成分保留;扫描电镜显示细胞外基质的网状超微结构;DNA含量极低;GAG含量有所减少;CCK-8显示脱细胞支架对细胞生长增殖无影响;异种移植显示脱细胞支架具有良好的生物相容性。（2）构建由蠕动泵、培养瓶、氧合器及输送管道组成的循环灌注培养体系;包膜直接注射法种植BRL细胞的成功率优于经门静脉途径,总蛋白和总胆汁酸合成能力良好,HE染色、免疫荧光及扫描电镜显示BRL细胞在脱细胞支架内定植、生长良好。（3）原代培养的大鼠骨髓源性内皮祖细胞CD31、CD133免疫荧光阳性,并能摄取DiI-ac-LDL和结合FITC-UEA;将内皮祖细胞通过门静脉途径种植到脱细胞支架内,HE染色、CD31免疫荧光显示内皮祖细胞定植于脱细胞支架血管腔内壁。结论（1）采用灌注法获得的大鼠肝脏脱细胞支架具有良好的理化性质和生物相容性。（2）大鼠肝脏脱细胞支架可以为肝细胞提供良好的三维生长环境。（3）循环灌注培养能成功将原代大鼠骨髓源性内皮祖细胞种植于大鼠肝脏脱细胞支架血管腔内壁。
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