铜和镉对唐鱼肝脏CYP1A和CYP3A的影响

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:buerzui
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文以唐鱼(Tanichthys albonubes)为试验材料,通过对唐鱼CYP1A和CYP3A的酶活性测定、mRNA表达测定和蛋白表达测定,于酶活、基因转录和翻译三个水平研究了重金属铜和镉对唐鱼两种细胞色素P450酶的影响,初步探讨了铜和镉污染与这些指标之间的变化关系。主要结果如下:1铜和镉对唐鱼肝脏CYP1A、CYP3A酶活性的影响测定了不同浓度的铜、镉单一暴露和铜—镉联合暴露对唐鱼肝脏CYP1A和CYP3A酶活性的影响。铜、镉对唐鱼肝脏CYP1A酶活性影响结果表明,低剂量组铜暴露下CYP1A酶活性于72h显著上升(p<0.05),96h继续上升并与对照组有显著性差异(p<0.05),高剂量组CYP1A酶活性于48h显著上升(p<0.05)并继续增加,72h和96h与对照组均有显著性差异(p<0.05):低剂量组镉暴露下CYP1A酶活性各时间点与对照组均无显著性差异(p>0.05),高剂量组CYP1A酶活性24h和48h与对照组相比无显著性差异,72h和96h显著性增加(p<0.05);铜—镉联合毒性对唐鱼肝脏CYP1A酶活性作用24h、48h和72h表现为协同效应,96h体现为拮抗效应。铜镉对唐鱼肝脏CYP3A酶活性影响结果表明,低剂量组铜暴露下CYP3A酶活性72h显著上升(p<0.05),96h继续上升并与对照组有显著性差异(p<0.05),高剂量组CYP3A酶活性48h显著性上升(p<0.05),72h略有下降,96h又继续上升,与对照组差异显著(p<0.05):低剂量组和高剂量组镉暴露下CYP3A酶活性均为24h、48h和72h与对照组无显著性差异,96h CYP3A酶活性显著增加(p<0.05);铜—镉联合毒性对唐鱼肝脏CYP3A酶活性48h和72h表现为协同作用,96h近似于独立作用。2铜和镉对唐鱼肝脏CYP1A、CYP3AmRNA表达量的影响利用同源克隆获得了431bP的唐鱼CYP3A基因cDNA片段(Genbank登录号:KC844034),利用荧光定量PCR技术测定了不同浓度的铜镉单一暴露和铜—镉联合暴露对唐鱼肝脏CYP1A和CYP3A mRNA表达量的影响。铜镉对唐鱼肝脏CYP3A mRNA表达量的影响结果表明,低剂量组铜暴露下CYP3A mRNA表达水平在48h显著上调(p<0.05),72h下降后96h继续显著上调(p<0.05),高剂量组CYP3A mRNA表达水平整体在48h显著上调(p<0.05);低剂量组镉暴露下CYP3A mRNA表达水平在48h表现为显著上调并达到峰值(p<0.05),随后呈下降趋势,96h又达到显著上调水平(p<0.05),高剂量组CYP3A mRNA表达水平在24h和48h与对照组均无显著差异(p>0.05),72h达到显著上调水平(p<0.05),96h有所下降,但仍与对照组差异显著(p<0.05);联合处理的各剂量组CYP3A基因mRNA表达水平相较于铜、镉单一暴露表现出一定的协同作用。铜、镉对唐鱼肝脏CYP1A mRNA表达量的影响结果表明,低剂量组铜暴露下CYP1AmRNA表达量在48h和96h诱导作用显著(p<0.05);高剂量组72hCYP1A基因表达水平显著低于对照组(p<0.05);低剂量组镉暴露下CYP1AmRNA表达量48h显著性增强(p<0.05),随后诱导作用逐渐下降;高剂量组CYP1A基因表达水平在48h和72h显著性降低(p<0.05),CYP1A基因表达受到抑制,96h抑制作用逐渐消失;铜—镉联合处理24h两种重金属离子表现为拮抗作用,48h联合毒性与单一毒性作用无明显差异,72h和96h表现为协同作用。3铜和镉对唐鱼肝脏CYP1A蛋白表达量的影响利用蛋白免疫印迹杂交技术测定不同浓度的铜镉单一暴露和铜—镉联合暴露对唐鱼肝脏CYP1A蛋白表达量的影响。结果表明,低剂量组铜暴露下CYP1A蛋白表达量48h显著上升(p<0.05),72h继续上升并达到峰值,约为对照组的4.8倍(p<0.05),96h与对照组无显著性差异,高剂量组CYP1A蛋白表达水平24h与对照组有显著性差异(p<0.05),诱导作用随时间的增加逐渐降低,48h和72h蛋白相对表达量与对照组均无显著性差异,96h蛋白表达量又显著增加(P<0.05);低剂量组镉暴露下CYP1A蛋白表达水平24h显著增加(p<0.05),48h略微下降,72h和96h CYP1A蛋白表达量与对照组无显著性差异;高剂量组CYP1A蛋白表达量24h与对照组有显著性差异(p<0.05),随后持续下降,48h、72h和96h蛋白相对表达量与对照组均无显著性差异;联合处理低浓度组CYP1A蛋白表达量各时间段与对照组相比都有显著性差异(p<0.05),随时间的增加呈先降后升的趋势;联合处理高浓度组CYP1A蛋白表达水平24h与对照组有显著性差异(p<0.05),48h与对照组无显著性差异,72h显著高于对照组(p<0.05),96h与对照组无显著性差异。通过试验发现,唐鱼CYP1A和CYP3A多种不同水平的指标对镉、铜胁迫的响应具有一定的可测性和较强的敏感性,可以为其作为生物标志物对水环境中的重金属污染进行监测与评价提供一定的理论基础。
其他文献