鹅肠道纤维素酶和蛋白酶活性分析以及纤维素降解菌的筛选

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为了探索鹅肠道内纤维素酶、蛋白酶的活性,并从肠道中分离筛选出高效的纤维素降解菌株,故本研究一方面对阳江鹅和朗德鹅肠道内纤维素酶活、蛋白酶活进行了测定,比较这些酶活在不同肠段的活性大小;另一方面从阳江鹅肠道分离了出了两株高效降解纤维素的菌株,并研究了其最佳产酶的条件,最后结合形态学、分子生物学的特性进行初步鉴定,为鹅合理的利用青饲料提供科学依据。本研究主要分为三个部分:试验一:阳江鹅和朗德鹅肠道内纤维素酶活、蛋白酶活的测定。试验结果表明:各肠段纤维素酶活由高到低排序为:阳江鹅各肠段纤维素酶活由高到低排序为:十二指肠>空肠>回肠>肌胃>盲肠。朗德鹅各肠段纤维素酶活排序为:空肠>十二指肠>回肠>盲肠>肌胃。各肠段蛋白酶活由高到低排序为:朗德鹅各肠段蛋白酶活由高到低排序为:空肠>十二指肠>盲肠>回肠;阳江鹅各肠段蛋白酶活由高到低排序均为:十二指肠>空肠>回肠>盲肠。试验二:拟定从阳江鹅肠道内分离筛选出能够降解纤维素的纤维素降解菌株,然后研究该菌株在不同的温度、时间、pH值条件下的产酶情况,从而对产酶的条件进行优化。试验结果表明:经过筛选得到了19株能够分解纤维素的降解菌,又经过溶解圈的大小观察,最终得到了两株降解能力较强的菌株,为来自十二指肠的D-1和来自回肠的J-1。经条件优化以后,菌株D-1在42℃条件下,保持pH=6,培养48h以后酶活最高达至0.89U/mL。菌株J-1在420C条件下,保持pH=6,培养48h以后酶活最高达至0.94U/mL。虽然两个菌株的最佳产酶条件相似,但是菌株J-1相较于D-1酶活较高,所以将菌株J-1作为下一步菌株鉴定试验的样品。试验三:通过16SrDNA技术手段对目的菌株进行形态学鉴定、分子生物学的鉴定。试验结果表明:菌株J-1,经过与Gene bank数据库里面的细菌16SrDNA序列的比对,比对结果显示J-1的序列与枯草芽孢杆菌的序列相似性达到了99%。同时也结合形态学观察、革兰氏染色和分子生物学鉴定三方面的结果,初步可以判定菌株J-1为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌。
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