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前言:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最常见、最严重的慢性微血管并发症之一,是糖尿病患者的主要死亡原因。DN最早的病理学改变是肾小球肥大、肾小球基底膜增厚以及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)积聚,这些均可以引起肾小球超滤过及微量蛋白尿。ECM主要产生在肾小球系膜细胞,后者在DN的肾小球硬化中起关键作用。既往研究表明,高糖是DN的始动因素,可引起氧化应激(oxidative stress,OS)。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)是体内重要的抗氧化酶,可间接反映氧自由基的清除能力。丙二醛(malondialdehyde,MDA)是脂质过氧化产物,可直接反映脂质过氧化的速度和强度。这3个指标的检测有助于综合评价氧化应激水平。高糖、氧化应激可刺激细胞增殖相关因子,如转化生长因子-β1(transforming growth factors,TGF-β1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)产生,参与DN的发生发展。已经证实TGF-β1是最主要的致纤维化生长因子,在肾小球硬化和间质纤维化发挥重要作用;VEGF在调节肾小球通透性方面起重要作用,病理状态下,它可促进系膜细胞增殖、ECM积聚,介导DN蛋白尿的产生。奥美沙坦酯(olmesartan medoxomil,OLM)是一种新型非竞争性、高选择性的非肽类血管紧张素Ⅱ1型受体(AngiotensinⅡtype 1 receptor,AT1)拮抗剂,新近研究表明本品有肾脏保护作用,其在DN发生发展中的肾脏保护作用及机制越来越受到人们的关注。目的:观察奥美沙坦酯对高糖状态下人肾系膜细胞增殖及相关生长因子TGF-?1、VEGF表达的影响及对细胞氧化应激指标的影响,进一步探讨奥美沙坦酯的肾脏保护作用及机制。方法:正常成年人肾小球系膜细胞(human renal mesangial cells,HRMCs)购于美国Sciencell公司。体外高糖培养HRMCs,取5-8代用于实验。实验分4组:1.低糖组(glucose 5.6 mmol/l)。2.高糖组(glucose 30 mmol/l)。3.低糖+DMSO(glucose 5.6 mmol/l+DMSO 2×10-5 mmol/l,LG+H-DMSO)组。4.高糖+奥美沙坦酯干预组,以低(HG+L-OLM)、中(HG+M-OLM)、高(HG+H-OLM)3组(OLM终浓度分别为2×10-7 mmol/l、2×10-6 mmol/l、2×10-5 mmol/l)奥美沙坦酯浓度干预48 h;以奥美沙坦酯(终浓度2×10-6 mmol/l)分别干预24 h,48 h。用比色法检测细胞上清中SOD、CAT的活性及MDA水平;以MTT方法观察细胞增殖;以ELISA方法检测细胞上清中TGF-β1、VEGF的含量;以RT-PCR方法检测细胞TGF-?1、VEGF mRNA表达水平。结果:1.肾小球系膜细胞在高糖环境的刺激下,细胞明显增殖;细胞上清中SOD、CAT活性显著下降,MDA含量明显升高。同时,肾小球系膜细胞TGF-β1、VEGF mRNA和蛋白表达明显上调。上述趋势在24 h可见,48 h显著增强。2. LG+H-DMSO组分别在各时间点与低糖组对比,可见DMSO(2×10-5 mmol/l)对正常HRMCs生存无影响。3.高糖环境中的肾小球系膜细胞经奥美沙坦酯干预后,细胞增殖明显受抑制,并呈药物浓度依赖性。4.高糖环境中的肾小球系膜细胞经奥美沙坦酯干预后, SOD、CAT活性升高,MDA含量下降,并呈药物浓度依赖性。5.高糖环境中的肾小球系膜细胞经奥美沙坦酯干预后,TGF-β1、VEGF mRNA和蛋白表达下降,并呈药物浓度依赖性。结论:高糖可诱导系膜细胞ROS产生增多,抗氧化酶活力下降。奥美沙坦酯可能通过抑制高糖所致的系膜细胞ROS产生增多及增加抗氧化酶活性,从而抑制增殖相关细胞因子VEGF、TGF-β1 mRNA和蛋白表达上调;也可能通过直接阻断高糖诱导的细胞因子(TGF-β1、VEGF)的表达,抑制系膜细胞增殖,发挥其肾脏保护作用。