MicroRNA（miRNA）是一类内源性的非编码小分子RNA，通过与目标信使RNA（mRNA）结合形成基因沉默复合物（RISC）调控基因的表达。MiRNA在细胞代谢、分化、免疫反应和肿瘤发生等生物过程中有重要的调控作用。许多研究表明，癌症组织中miRNA的表达异常通常与多种miRNA（一般是2-15个）有关。因此，建立一种灵敏度高、精密度好、可以同时检测多种miRNA的方法不仅在癌症的早期临床诊断和治疗方面有重要作用，对于深入了解肿瘤发生的机理也有重要的意义。本文建立了一种基于多重连接探针扩增技术（MLPA）高灵敏度检测多重miRNA的方法，使用RNA碱基修饰的DNA探针，以miRNA为模板，能够被T4RNAligase2高效连接。利用PCR对连接的探针扩增，毛细管电泳对PCR产物进行分离检测，可检测低至0.2fmol/L的let-7a，并且能区分miRNA序列中单个碱基的错配。我们随机选取了5种序列不相关的miRNA：mir-92a、mir-31、mir-143、mir-145和let-7a。该5种miRNA以不同长度的DNA探针进行编码，可在同一管PCR扩增反应中同时得到高灵敏度检测。将此方法进一步应用于A549细胞系（人类肺腺癌细胞株）中total RNA的miRNA检测，可以同时检测出5种目标miRNA，表明此方法能用于实际样品分析。因此，基于MLPA多重检测miRNA技术提供了一种高灵敏度、高通量检测多种miRNA的方法。