艾纳香油化学成分分离及其质量标准研究

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目前艾纳香油仅被收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版),但是该标准所指定的监控内容过于简单,仅监控左旋龙脑这单一成分的含量导致缺乏稳定可靠,可控有效且安全的质量标准体系。由于市场上没有全面统一的质量标准,不同企业生产的艾纳油品质各异,批次间质量不稳定导致产品质量高低不齐。因此,对艾纳香油活性成分及其质量控制标准进行研究是十分有必要的,对此展开的研究内容如下:1.艾纳香油中化学成分检识研究通过化学和泡沫试验定性检识确定了艾纳香油中均含有总黄酮类,总有机酸类成分,部分艾纳香油中含有总蒽醌类成分,但无生物碱,总皂苷类及总多糖类成分;采用UV法测定了总黄酮类、总有机酸类、总蒽醌类的含量范围分别为0.165~0.843、8.33~28.060、0~0.152 mg·g-1。2.艾纳香油中化学成分分离研究2.1.艾纳香油GC-MS化学成分分析测定采用GC-MS分析技术检测了艾纳香油中化学成分,结果显示经水蒸气蒸馏法得到的艾纳香油中主要成分为左旋龙脑(20.18%),反式石竹烯(15.81%),樟脑(10.44%),石竹烯氧化物(5.57%),花椒油素(5.31%),百里氢醌二甲醚(3.02%),香树烯(3.18%),芳樟醇(2.09%),1-辛烯-3-醇(1.15%)等75种成分。2.2.艾纳香油硅胶柱层析分离研究采用硅胶柱层析对艾纳香油进行石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯梯度洗脱,经GC-MS鉴定得到花椒油素(96.033%)、反式石竹烯(34.446%)、石竹烯氧化物(60.291%)、百里氢醌二甲醚(49.306%)、左旋龙脑(81.982%)、α-柏木脑(42.850%)、茉莉酸甲酯(13.637%),其中首次在艾纳香油中分离得到茉莉酸甲酯和α-柏木脑。2.3.艾纳香油中压制备分离研究对艾纳香油进行HPLC中压制备分离得到纯度高达99.335%花椒油素。3.艾纳香油质量标准提升研究3.1.理化性质根据《中国药典》2015版要求,依次对艾纳香油的理化性质、检查参数进行了测定与研究,结果表明:艾纳香油的比旋度为-26.368°~-28.773°,折光率为1.4812~1.4954,相对密度为0.9458~0.9852。艾纳香油为黄色至棕红色、澄清的液体,具有特异芳香气味,具部分挥发性,冷时部分艾纳香油可常析出结晶,加温后又澄清。易溶于乙醇、氯仿、乙醚,几乎不溶于水。检查:重金属不得超过百万分之十;取艾纳香油1 m L,加1 m L 85%乙醇,溶液应为澄清。3.2.TLC鉴别确定以硅胶G板,乙酸乙酯-环己烷-氯仿(1.5:10:3)为最佳展开剂,可有效地对艾纳香油中左旋龙脑、花椒油素、芳樟醇、β-石竹烯、α-葎草烯5种主要活性成分进行分离鉴别。3.3.HPLC-DAD同时测定艾纳香油中7种活性成分含量建立同时测定艾纳香油中β-石竹烯、石竹烯氧化物、花椒油素、β-蒎烯、芳樟醇、α-蒎烯、α-葎草烯7种活性成分含量方法,色谱条件为Supersil-T C18色谱柱(4.6×150 mm,5μm),乙腈(A)-0.4%磷酸水(B)梯度洗脱:0-5 min,28%A;5-50min,30%A;50-55 min,28-8%A;55-135 min,48%A;135-145 min,48-70%A;145-155 min,70-80%A;155-165 min,80%A;165-180 min,80-28%A;柱温25℃,进样量10μL,流速1.0 m L?min-1,λ=202 nm。13批艾纳香油该7种成分的含量范围分别为76.151~168.710、11.476~127.236、8.350~44.200、21.629~59.091、2.761~23.249、2.342~9.711、6.458~11.164 mg·g-1。3.4.艾纳香油HPLC指纹图谱研究本实验以13批不同产源艾纳香油药材作为对象,建立其指纹图谱。采用高效液相色谱法,条件为Supersil-T C18色谱柱(4.6×150 mm,5μm),流动相采用乙腈-0.4%磷酸水系统,梯度洗脱,检测波长为202 nm,进样量10μL,柱温25℃,流速1.0 m L?min-1。通过中药材指纹图谱相似度评价系统(2.0版)建立了13批艾纳香油HPLC指纹图谱,共标定了17个共有峰,各供试品HPLC指纹图谱与对照特征指纹图谱之间的相似度均在0.93以上。3.5.艾纳香油的稳定性考察通过影响因素试验结果表明,艾纳香油在高温条件下存放时,其性状与质量均在较短时间内发生不可控、不可逆的显著性变化;6个月的加速试验结果表明,艾纳香油的外观性状和活性成分均较稳定,未发生显著性变化,因此,建议艾纳香油应低温,可不避光,密封存放,建议保存时间为1年。
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