酚氧化酶(ECl.10.3.1)能够催化单酚羟化成二酚(如多巴)，并把二酚氧化成醌；醌在非酶促条件下形成最终的反应产物黑色素。酚氧化酶(phenoloxidase，PO)广泛存在于无脊椎动物和脊椎动物中。在无脊椎动物中(节肢动物和软体动物)，PO主要参与宿主的非特异性免疫防御反应；其中在头足类动物中则主要参与墨汁黑色素和表皮细胞色素的形成。在脊椎动物中PO主要参与皮肤色素的形成。由于PO在无脊椎动物中的重要作用，对PO的研究主要集中于无脊椎动物。但到目前为止，还没有软体动物八腕目动物PO的研究报道。 短蛸(Octopus ocellatus)属于软体动物门头足纲八腕目蛸科(章鱼科)，短蛸又名八带或短脚蛸，广泛分布在渤海、黄海、东海、南海和日本列岛等海域，是备受人类喜爱的美味动物。对短蛸酚氧化酶的分离纯化和性质研究，不仅对于认识酚氧化酶在墨汁黑色素形成过程中的生物学功能和作用机制具有重要的意义，而且还有助于我们查清其在进化中的地位。 为了揭示短蛸酚氧化酶的生物化学性质，本文以短蛸墨汁为材料，利用Sephacryl S-100凝胶过滤柱层析和DEAE Sepharose。Fast Flow离子交换柱层析等方法，对短蛸PO进行了分离纯化和部分生物化学性质研究。PO分离纯化和生物化学性质鉴定结果发现，短蛸PO分子量可能为153.8 kDa，含有为75.6 kDa和73.0 kDa两个亚基。以L-二羟苯丙氨酸(L-DOPA)为特异性底物对PO活性进行研究发现，其最适pH值为7.0左右，最适温度为40℃左右；对底物．L-DOPA的Km值约为3.1 mmol／L，对底物儿茶酚(catechol)的K<,m>值约为6.3 mmol／L；综合该PO能氧化L-DOPA和儿茶酚(临苯二酚)、而不能氧化对苯二酚和酪氨酸(单酚)的实验结果，表明该酶极可能是一种儿茶酚酶(catechol oxidase)类型的酚氧化酶。利用多种氧化酶抑制剂对PO纯化样品的酶活性进行研究发现，苯硫脲(phenyl thiourea)和亚硫酸钠(sodium sulfite)对PO活性具有很强的抑制作用；抗坏血酸(ascorbic acid)、硫脲(thio urea)和柠檬酸(citric acid)、苯甲酸(benzoic acid)对PO活性也具有较强的抑制作用，而PO对半胱氨酸(cysteine)不敏感，儿茶酚酶的特异性抑制剂苯硫脲能强烈抑制短蛸PO的活性，表明该酶确为儿茶酚酶。该酶对EDTA，DETC和金属离子非常敏感，其活性能被Cu<2+>，EDTA和DETC强烈抑制，Mg<2+>，Ca<2+>则能增强该酶的活性，并且IO mmol/L Cu<2+>能有效恢复被DETC抑制的酶活，表明该酶很可能是一种Cu-金属酶(Cu-metalloenzyme)。由此可见，短蛸PO极可能是一种儿茶酚酶类型的Cu-金属酶。