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目的:探讨脓毒症患者外周血miRNA-6786的表达,体外LPS刺激巨噬细胞模型探讨miRNA-6786通过靶基因FRAT-2调控参与炎症反应过程,并探究其调控机制为wnt/β-catenin和NF-KB信号转导通路。方法:1.临床研究:(1)脓毒症组(sepsis组)及健康对照组(NC组)各30例,sepsis组于入院d1、NC组于体检时取外周血,通过RT-PCR法检测miRNA-6786的表达。(2).利用Mi RDB数据库预测miR6786与何种靶基因及信号通路的相关性最高。2.体外细胞实验:(1)THP-1单核巨噬细胞诱导分化为巨噬细胞后分为6组:(1)正常巨噬细胞组(C组);(2)LPS刺激巨噬细胞组(L组):10ug/ml LPS刺激巨噬细胞;(3)miR-6786mimic转染组(L+M组):miR-6786mimic转染巨噬细胞后10ug/ml LPS刺激;(4)miR-6786mimic转染对照组(L+MC组):乱码无功能miR6786mimic转染巨噬细胞后10ug/ml LPS刺激;(5)miR-6786inhibitor转染组(L+IN-M组):miR-6786inhibitor转染巨噬细胞后10ug/ml LPS刺激;(6)miR-6786inhibitor转染对照组(L+IN-MC组):乱码无功能的miR6786inhibitor转染巨噬细胞后10ug/ml LPS刺激。(2)RT-PCR测定巨噬细胞FRAT-2、β-catanin、NF-KB m RNA表达。(3)Western Blot测定巨噬细胞FRAT-2蛋白的表达。(4)ELISA测定细胞上清中IL-1β及IL-6、TNF-α的炎症因子。结果:1.临床研究结果:RT-PCR测定NC组和sepsis组的miRNA-6786表达量分别为:(1.34±0.026,7.350±1.418),sepsis组较NC组miRNA-6786的表达显著增高(t=18.92,P<0.0001)。2.体外细胞实验:(1)RT-PCR测定miR-6786结果:L组较C组miRNA-6786的表达量表现升高(t=44.5,P<0.0001),L+MC组、L+IN-MC组较L组miRNA-6786表达的无明显差异(P>0.05),L+M组较L+MC组miRNA-6786的表达量明显升高(t=49.5,P<0.0001),L+IN-M组较L+IN-MC组miRNA-6786的表达量明显减低(t=14.8,P<0.0001)。RT-PCR测定FRAT-2、β-catanin、NF-KB的m RNA结果:L组较C组FRAT-2的m RNA无显著差异(P>0.05),β-catanin、NF-KB m RNA表达量明显升高(t=20.9和5.00,P<0.05),L+MC组、L+IN-MC组较L组FRAT-2、β-catanin、NF-KB m RNA表达无显著差异(P>0.05),L+M组与L+MC组相比,FRAT-2的m RNA无显著差异(P>0.05),β-catanin、NF-KB m RNA表达量明显降低(t=11.5和15.6,P<0.001),L+IN-M组与L+IN-MC组相比,FRAT-2的m RNA无显著差异(P>0.05),β-catanin、NF-KB m RNA表达量明显升高(t=40.0和9.098,P<0.001)。(2)Western Blot测定FRAT-2蛋白结果:L组较C组蛋白灰度值表现降低(t=10.3,P<0.0001),L+MC组、L+IN-MC组较L组蛋白灰度值无显著差异(P>0.05),L+M组与L+MC组相比,FRAT-2蛋白灰度值明显降低(t=17.7,P<0.0001),L+IN-M组与L+IN-MC组相比,FRAT-2蛋白灰度值明显升高(t=15.2,P<0.0001)。(3)ELISA测定IL-1β及IL-6、TNF-α结果:L组较C组IL-1β及IL-6、TNF-α的表达量升高(t=17.3、11.8和19.9,P<0.001),L+MC组、L+IN-MC组较L组IL-1β及IL-6、TNF-α的表达量无显著差异(P>0.05),L+M组与L+MC组相比,IL-1β及IL-6、TNF-α的表达量显著降低(t=12.5、8,20和7.72,P<0.05),L+IN-M组与L+IN-MC组相比,IL-1β及IL-6、TNF-α的表达量显著升高(t=5.45、5.91和19.2,P<0.05)。结论:1、本研究发现mi-R6786在脓毒症患者外周血中高表达。2、LPS刺激的巨噬细胞实验证明:mi-R6786通过抑制FRAT2蛋白的产生,影响巨噬细胞Wnt/β-catenin通路,减弱NF-KB的转录活性,从而减少IL-1β、IL-6及TNF-α等促炎因子释放。3、LPS刺激巨噬细胞可以一定程度增加miR-6786,但未出现明显的抑炎作用,miR-6786转染后可明显提高miR-6786的表达量,明显减少IL-1β、IL-6及TNF-α等促炎因子释放,可能存在与miR-6786有关的量效关系。