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目的:应用实时荧光定量PCR技术检测大鼠肌肉挫伤后骨骼肌肌钙蛋白I(skeletal troponin I,sTnI)mRNA表达,探寻其时序性表达规律,探讨sTnI mRNA表达变化应用于损伤时间推断的可行性,旨在为法医学早期损伤时间的推断提供科学依据。方法:选取健康成年雄性SD大鼠63只,随机分为正常对照组(6只)、死后损伤组(9只)和生前损伤组(48只)。均实施麻醉、褪毛后,利用改进的自由落体装置,250g重力锤自150cm高度垂直自由落下,造成大鼠右后肢大腿内侧肌群挫伤。损伤后0.5h、1h、6h、12h、18h、24h、30h、36h八个时间点(每个时间点6只)取挫伤处肌肉组织50mg,置于液氮中保存备用;正常对照组大鼠未打击造伤;死后损伤组脱颈处死后,自由落体打击同一部位,其余处理与实验组相同。以膜吸附技术为基础的SV Total RNA Isolation System提取肌肉组织中的总RNA,逆转录合成cDNA第一条链,梯度浓度稀释cDNA原液分别制作sTnI和参比基因的相对定量标准曲线;选取管家基因核糖体蛋白L32(Ribosomal Protein L32,RPL32)为参比基因,利用SYBR Green I嵌合荧光法实时定量PCR检测sTnI mRNA逆转录合成cDNA的相对表达量,分别与损伤时间进行统计学分析。结果:(1)Agilent 2100芯片生物分析仪和2%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测总RNA纯度、浓度及完整性较好,均可满足下一步实验的要求。(2)sTnI与参比基因RPL32扩增效率分别为103.6%和100.5%,一致性较好,说明参比基因选择正确;扩增曲线拐点清楚,基线平而无上扬现象,说明引物设计特异性强、反应性能良好;sTnI基因融解温度为88°C,RPL32基因融解温度为84°C,两者融解曲线均为单一峰型,基底窄而峰高,表明并无引物二聚体等非特异性扩增产生。(3)大鼠骨骼肌挫伤后sTnI mRNA表达明显下调(P<0.05),挫伤后0.5h、1h、6h sTnI mRNA表达量分别为正常组的78.17%、41.58%、32.13%且差异具有统计学意义(P<0.05),6h~36h sTnI mRNA表达量与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。(4)为了比较生前损伤组正常肌肉与损伤肌肉中sTnI mRNA的表达水平,选取挫伤后18h组大鼠左后肢同一部位取材。结果表明正常肌肉中sTnI mRNA表达与正常对照组相比无差异(P>0.05),而同一个体损伤肌肉中sTnI mRNA表达与正常肌肉中sTnI mRNA表达存在差异(P<0.05)。(5)与正常对照组相比,死后损伤组双后肢sTnI mRNA的量约下降了30%(P<0.05),死后损伤组各时间点sTnI mRNA的量无差异(P>0.05)。结论:(1)生前损伤组正常肌肉中sTnI mRNA表达与正常对照组相比无差异(P>0.05),而同一个体损伤肌肉中sTnI mRNA表达与正常肌肉中sTnI mRNA表达存在差异(P<0.05), sTnI mRNA的表达仅在损伤肌肉中发生下调,同一个体未遭受损伤部位的肌肉可以作为评价损伤肌肉的对照。(2)大鼠肌肉挫伤后36h内sTnI mRNA呈时序性表达下调趋势,与损伤时间有一定的关系,其时序性变化可望作为骨骼肌早期损伤时间推断的指标之一,服务于法医学实践。(3)实时荧光定量PCR技术检测分子水平的变化敏感而且准确,适合法医学研究及检案的需要。