论文部分内容阅读
单态氧(1O2)是分子氧的激发态,是最重要的活性氧之一.单态氧在生物体系中起着十分重要的作用,多种疾病的发生发展及机体的衰老都与单态氧的活动密切相关。探测生物体内单态氧的产生,分布和含量,对于基础研究或临床研究都具有十分重要的意义。
本论文的研究工作主要集中在利用化学发光测量和光谱技术,分析了FCLA(FluoresceinylCypridinaLuciferinAnalog)对人血清白蛋白(HSA)的荧光猝灭机制,探讨了HSA增强FCLA化学发光的机理,同时对它的应用进行了初步的研究。论文中首先介绍了单态氧的产生途径及主要的探测方法,然后就研究工作中主要使用的一种可以特异检测1O2和O2-的高灵敏化学发光探针——海萤荧光素类似物(CypridinaLuciferinAnalog,CLA)的性能做了详细介绍,接着对人清白蛋白(HSA)的性能做了详细介绍。
在第一部分实验工作中,主要介绍了光谱法研究FCLA与人血清白蛋白的相互作用。一定HSA浓度下,不同浓度的FCLA对HSA的荧光有相应程度的猝灭。通过对荧光猝灭的化学计算,分析了FCLA与HSA发生相互作用的机理,发现FCLA可以与HSA发生缔合,并有一个缔合位点数。而在FCLA对HSA的荧光淬灭的过程中,FCLA的荧光同时在增强。
在第二部分的实验工作中,主要介绍了在光敏反应的体系中,一定光敏剂浓度、光照功率密度,两个FCLA的浓度,不同的HSA/FCLA比例的情况下,HSA对FCLA的化学发光的增强。然后检测了同一FCLA、HSA浓度,不同光敏剂浓度下的HSA对FCLA的化学发光的增强,以及在一定FCLA、HSA、光敏剂浓度、光照功率密度的情况下,化学发光下降到本底信号的HSA对FCLA的化学发光的增强的测量。同时分析了单态氧淬灭剂NaN3对FCLA及FCLA-HSA的化学发光的淬灭效果。
在产生单态氧的化学体系中,可以检测到单独的HSA与单态氧反应产生的化学发光,而在加入FCLA后,HSA的发光降低,FCLA的发光增强。这说明HSA不论是光激发到激发态还是与单态氧反应生成一个激发态产物,在FCLA-HSA缔合物中都存在内部分子的能量转移。HSA与FCLA缔合后,HSA与单态氧反应生成激发态的蛋白羰基,其激发态能转移给FCLA导致FCLA受激发,FCLA激发态退激发后发光,从而导致化学发光增强。
第三部分工作中初步分析了人血清白蛋白对FCLA化学发光增强的应用。FCLA活体内进行光动力诊断得到了很好的应用,HSA又是人血浆中含量最丰富的载体蛋白。当FCLA与HSA缔合后,FCLA的在体使用效率有望得到提高。FCLA-HSA的化学发光与光动力疗法(PDT)的各个治疗参数成一定的关系,表明增强的化学发光也可作为光动力疗法的一个剂量参数来反应治疗效果。