研究背景高强度聚焦超声(High Intensity Focused Ultrasound, HIFU)作为一种新兴的非侵入性治疗手段,已经应用于临床多种疾病的治疗,诸如子宫肌瘤、肝癌、肾癌、骨肿瘤、乳腺癌等实体肿瘤和过敏性鼻炎、关节炎、宫颈炎等非肿瘤性疾病中,并取得了良好的治疗效果。HIFU治疗的原理是将体外低能量的超声束聚焦到体内病灶处并形成高能量的焦点,利用超声对生物组织的热效应、空化效应和机械效应等使焦点处的温度瞬间升至56℃以上,导致该处组织形成不可逆的凝固性坏死,但不影响周围的正常组织,从而达到治疗的目的。作为非侵入性治疗方式,必须要有可靠而准确的监控方式。目前所用的监控方式有B超和磁共振(Magnetic Resonance Imaging, MRI)。其中,B超监控具有实时性好、价格低廉、与HIFU设备兼容性好等优点,且B超监控的HIFU设备己大量应用于临床中。B超监控的原理是以HIFU辐照后即刻B超声像图中强回声的出现作为一个单元治疗完成的标志。但是,对于该强回声出现的原因,目前尚不甚明了有部分学者指出,出现强回声主要是HIFU致靶区空化行为产生的空化泡所致；也有学者指出是靶区温度上升产生的沸腾泡所致。HIFU辐照后组织中所形成的凝固性坏死应为椭球形,但在某些情况下,坏死形态会发生变化,呈水滴状甚至三角形。关于该形态变化的原因,争论也集中在辐照中对HIFU束遮挡的空化泡和沸腾泡之间。目前HIFU治疗所用的主要机制是热机制,但是其另一机制——空化机制发生时,可以在局部产生高温、高压、高速射流等极端物理现象,从而对组织造成损伤。且有研究者指出,HIFU辐照中强回声的出现意味着过度治疗,即能量的过度沉积而致靶区的温度过高,会影响到治疗的安全性。另有研究者指出,脉冲HIFU (pulsed High Intensity Focused Ultrasound, pHIFU)的应用可以避免靶区的明显温升,从而利用其非热效应。基于上述背景,本研究基于一台商业HIFU肿瘤治疗系统,选择不同的辐照参数,辐照离体牛肝组织,以在焦域处产生空化泡和/或沸腾泡,在辐照后即刻采集B超声像图,与辐照前同一位置的声像图进行比较,并解剖牛肝组织,初步研究HIFU辐照中空化泡和沸腾泡对焦域处回声增强和凝固性坏死形态改变的影响。此外,本研究还利用pHIFU辐照离体牛肝组织,利用其非热效应,特别是空化效应对组织造成损伤,并对其损伤机制和B超监控进行了初步研究。目的1.初步研究HIFU辐照后即刻B超声像图中强回声出现的原因；2.初步研究HIFU辐照所致凝固性坏死形态发生改变的原因；3.利用pHIFU辐照离体组织,研究其造成非热损伤的可行性;4.初步研究pHIFU辐照所致非热损伤的机制及B超监控的可行性。方法1.HIFU辐照离体组织中的空化和沸腾对B超强回声及凝固性坏死形态的影响1.1实验材料：屠宰后6小时内的新鲜离体牛肝组织,取血管和结缔组织较少处切成约100mm×100mm×60mm大小的方块,置于生理盐水中脱气30min待用；1.2实验仪器与设备：JC200型HIFU肿瘤治疗系统(凹球面聚焦,B超监控,频率0.94MHz)；被动空化检测(Passive Cavitation Detection, PCD)系统：平面压电换能器(中心频率0.5MHz和5MHz),LabVIEW开发平台,水浸数据线等；温度采集系统：E型热电偶,温度巡检仪,数据采集程序和计算机等。1.3实验方法：(1)校正HIFU声输出；(2)使用HIFU定点辐照脱气后的离体牛肝组织,深度为20mm,辐照参数为：50W×10s、50W×80s、100W×10s、150W×5s、200W×2s和200W×5s；(3)HIFU辐照过程中使用PCD系统采集焦域处的声发射信号(acoustic emissions,主要为空化信号)后对该信号进行快速傅立叶变换(Fast Fourier Trans form at ion, FFT)后记录次谐波和四次谐波的幅值随辐照时间的变化情况。另对该信号进行带通滤波(3～7MHz)和带阻滤波(滤除通带内的高次谐波)后计算其均方根(Root Mean Square,RMS),并得到RMS随辐照时间的变化曲线；(4)HIFU辐照中使用温度采集系统记录焦域处的温度,并绘制其随辐照时间变化的曲线；重复6次实验,对焦域处的最高温度进行统计学分析；(5)HIFU辐照后即刻采集B超声像图,并与辐照前同一位置的B超声像图进行比较,重复20次实验,对结果进行分析；(6)HIFU辐照结束后,将牛肝组织切成1～2mm厚的薄片,找到凝固性坏死最大面积所在层面,观察坏死的形态。2.脉冲HIFU辐照离体组织所致非热损伤的初步实验研究2.1实验材料：同上；2.2实验仪器与设备：同上；2.3实验方法：(1)校正HIFU声输出,并调整HIFU输出为脉冲模式；(2)使用pHIFU定点辐照脱气后的离体牛肝组织,辐照参数见后表；(3)辐照中使用PCD系统采集焦域处的空化信号,并进行FFT变换,焦域处的温度由温度采集系统获取后绘制其随辐照时间的变化曲线,并得到6次辐照中焦域处的最高温度；(4)辐照后即刻,采集B超声像图,并与辐照前同一位置的B超声像图进行比较,计算靶区灰度的变化值；(5)辐照结束后,将牛肝组织切成厚为1～2mm的薄片,找到损伤最大面积所在层面,观察损伤形态,选取标本进行hematoxylin-eosin (HE)染色,并在光镜下观察。声功率(W)占空比脉冲重复频率(Hz)辐照时间(s)深度(mm)1%602%305004203%204%15结果1.所有参数的HIFU辐照中均可见次谐波出现；声功率为50W和100W的HIFU辐照中宽带噪声的RMS未见增大；声功率为150W的HIFU辐照中RMS开始较小,后增大；声功率为200W的HIFU辐照开始RMS即较大,在5s的辐照中有减弱趋势；2.参数为50W×10s、50W×80s、100W×10s、150W×5s、200W×2s、200W×5s和的HIFU辐照中焦域处的最高温度分别为62.40±6.50℃、93.61±2.46℃、67.29±2.56℃、77.84±6.96℃、75.69±5.18℃和88.10±4.06℃；3.参数为50W×10s、100W×10s、150W×5s和200W×2s的HIFU辐照后即刻B超声像图中未见强回声(强回声出现率分别为0、15%、10%和5%),凝固性坏死形态较规则；另2个参数的HIFU辐照后即刻B超声像图中观察到强回声出现(强回声出现率均为95%),辐照后坏死形态发生改变；4.参数为50W×80s和200W×5s的HIFU辐照中四次谐波可见增加,且200W声功率的HIFU辐照中四次谐波增加后宽带噪声的RMS减小；5. pHIFU辐照后所致非热损伤为洞状,无固态内容物；6.500W声功率下,1%～4%占空比的pHIFU辐照中焦域处的最高温度分别为41.19±1.42℃,45.73±1.92℃,53.07±2.09℃和64.13±2.56℃,且辐照中均可见明显的宽带噪声；7. pHIFU辐照后即刻B超声像图中靶区灰度减小,回声变弱。结论1. HIFU辐照中焦域处的空化泡和沸腾泡对辐照结果的影响不同；2. HIFU辐照后即刻B超声像图中强回声的出现和凝固性坏死形态的改变主要来自于辐照中焦域处由于温度升高所致沸腾泡对回声的散射和对HIFU束的遮挡；3.PCD系统所采信号的频谱中四次谐波的增大可能与焦域处的沸腾泡有关,若上述关系成立,则当焦域处的温度约为80℃时,出现沸腾泡；4. pHIFU辐照中焦域处的温升受占空比的影响,高声功率、低占空比的pHIFU辐照可以由非热效应在组织内产生非热损伤,且空化效应可能是该损伤产生的主要机制；5.B超可用于pHIFU辐照所致非热损伤的监控,但其监控的算法、有效性、准确性等需要进一步研究。