论文部分内容阅读
烧伤创面是引发机体病理生理变化的基础，目前已公认烧伤早期切削痂、及时封闭创面是提高大面积深度烧伤患者成活率最关键的措施之一。目前经常用的自体刃厚皮覆盖深度烧伤创面的方法虽然可以及时封闭创面，但由于刃厚皮真皮成分较薄，往往会造成植皮区愈合后瘢痕和挛缩。而且，该方法还会引发供皮区的新创伤，特别是当自体皮切取较厚时会引发供皮区愈合后的新瘢痕。对于自体皮源匮乏的大面积深度烧伤患者则常用“自体微粒皮+异体皮”技术，但是微粒皮无法象正常皮肤那样生长扩散，愈合后的瘢痕挛缩还需要手术进行整复。因此，研究永久性皮肤替代物对于覆盖大面积深度烧伤患者创面具有极其重要的意义。研究目的 近年来，随着组织工程技术的发展，各种皮肤替代物应运而生。由于猪皮具有来源极其广泛、价格低廉且与人有较高的组织同源性等优点，因此本实验拟研制一种选择性去细胞异种(猪)皮敷料(SAPS)用于烧伤创面的覆盖；同时研制异种(猪)去细胞真皮基质(PADM)与自体刃厚皮或与自体微粒皮和异体皮构成的复合皮，并观察其覆盖深度烧伤创面的效果；另外，还对PADM在体内的转归做初步观察。材料和方法1．异种(猪)皮敷料的研制1．1 SAPS的研制 在经典酶消化法的基础上采用了福尔马林-胰蛋白酶-去污剂的方法制备SAPS。通过福尔马林的处理可使表皮细胞失活，同时加强表皮与真皮连摘要解放军军医进修学院硕十论文接;胰蛋白酶的消化使酪蛋白解离;Tri tonx一100连续震荡36小时，基本可将真皮中的细胞成分全部去除。1.2 PADM的研制 0.25%胰蛋白酶37℃消化皮片(0.3一0.sflun)30分钟去除表皮，0.5%Tr 1 tonX一100 37℃持续震荡24小时去除真皮中的细胞成分，0.5%戊二醛交联10分钟。2.动物实验2.1以SD大鼠为动物模型，背部做全层皮肤缺损，使用微粒皮分别与SAPS、异体皮、戊二醛皮及油纱覆盖皮肤缺损，术后1、2、4周定期观察植皮区愈合情况及组织学变化。2.2以SD大鼠为动物模型，背部做全层皮肤缺损，分别用PADM+微粒皮+异体皮(实验组工)、PADM+刃厚皮(实验组11)和微粒皮+异体皮(对照组)覆盖，术后2、4、6周观察植皮区愈合情况及组织学变化。2.3以SD大鼠为动物模型，将PADM植入皮下，术后1、2、4、6、8、12、16、20、30周观察其组织学及大体变化。3.临床观察 在知情同意前提下选取合适患者，深度烧伤创面切痴后，肉芽创面清创后及瘫痕挛缩畸形切疤后分别用PADM+刃厚皮或PADM+微粒皮十异体皮覆盖创面。术后观察愈合情况。实验结果及结论1.经组织学及免疫组织化学染色证实，SAPS表皮层连续，胶原纤维排列有序，基底膜结构完整，无细胞成分。以SAPS为覆盖物的创面愈合效果略差于异体皮覆盖创面的效果，但明显优于戊二醛皮和油纱组覆盖创面的效果。2.动物实验和临床观察证实，实验组工(PADM+自体微粒皮+异体皮)与实验组H(PADM+自体刃厚皮)愈合质量相似但明显优于对照组(自体微粒皮+摘要解放军军医进修学院硕十论文异体皮)。实验组工和实验组H收缩率比较无统计学差异(P>0.05)，但与对照组相比较低且具有统计学差异(P<0.05)。实验组I植皮成活率低于实验组H且具有统计学差异(P<0.05)，但与对照组比较无统计学差异(P>.05)。术后4周，实验组工、H组织学变化相似，均可见上皮细胞分化良好，胶原纤维排列有序，基底膜结构完整，而对照组上皮较薄，胶原纤维排列紊乱，基底膜结构不完整。3.植入皮下PADM术后30周仍然可见其大体结构;同时组织学观察发现，其可诱导自身成纤维细胞、毛细血管有序长入。小结1.动物实验证实，SAPS具有去细胞真皮支架和失活表皮的特征，可作为一种暂时性皮肤替代物;2.PADM与自体刃厚皮复合移植可改善创面愈合质量;3.PADM结合自体微粒皮和同种异体皮复合移植较自体微粒皮结合同种异体皮复合移植效果为佳;4.植入皮下PADM术后30周仍然可见其大体结构:同时组织学观察发现，其可诱导自身成纤维细胞、毛细血管有序长入。