日本对虾细胞凋亡相关基因PjCaspase的功能研究

来源 :厦门大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:vvpmlc
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
对虾是最重要的海水养殖产品之一,但是自从1990年代以来,一直受到病害的严重威胁,尤其是对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus, WSSV),已成为危害对虾养殖的最主要病原。因此,充分了解对虾的非特异性免疫系统,从而探索对虾病害防治的新途径具有重要意义。本实验室在以前的研究中,通过抑制差减杂交(SSH)发现了日本对虾中一段与细胞凋亡相关的基因序列,为了进一步了解该基因在对虾抗病毒免疫中的作用,本论文开展了该基因的功能研究,以期为对虾病毒病的防治提供依据。通过5’和3’RACE技术,从日本对虾中获得了该基因的cDNA全长,它含有一个预测的开放阅读框(ORF),长度为1524bp,编码508个氨基酸,与caspase蛋白酶家族具有同源性,因此将其命名为PjCaspase基因。相应的DNA分析发现,PjCaspase基因含有两个内含子,三个外显子。采用Genome walker技术获得了该基因的启动子,并进一步验证了其功能。将PjCaspase基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-2中,获得了重组蛋白。研究表明,纯化的重组蛋白具有蛋白酶活性,证明PjCaspase具备Caspase的基本性质。通过RT-PCR、Northern blot和Western blot等分析发现,该基因在除心脏外的其他组织中均有转录表达。用WSSV病毒刺激后,在不同时间提取病毒对虾和抗病对虾肝胰腺总RNA,进行Real-time PCR分析,结果发现PjCaspase基因在抗病对虾中上调表达,说明该基因参与了对虾抗病毒的免疫过程。为了进一步了解PjCaspase在细胞凋亡中的作用,采用RNAi技术抑制PjCaspase基因的表达。结果表明,当PjCaspase基因的转录表达受到抑制时,对虾的细胞凋亡也受到抑制,这说明PjCaspase基因直接参与细胞凋亡。本论文初步研究发现,对虾Caspase具有基因多样性,抗病对虾中Caspase蛋白序列的变化,低于正常对虾。
其他文献
Nano-Al2O3 particles modified AgCuNi filler was adopted to braze the SiO2 ceramic and TC4. The effects of filler size as well as the brazing temperature on the
Introducing flexibility into the design of a vertically flapping wing is an effective way to enhance its aerodynamic performance. As less previous studies on th
With the increasing applications of novel materials and structures in new-generation air-craft, conventional joining techniques in aircraft component assembly a