SOX7抑制wnt/β-catenin信号通路影响膀胱癌EMT进程的机制研究

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:bingjilin1986
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目的膀胱癌作为泌尿系最常见的恶性肿瘤之一,一直位于全球的新发肿瘤的前十,在我国膀胱癌一直是我国男性最常见的泌尿生殖系恶性肿瘤,其发病率及死亡率有逐渐增高的趋势。膀胱癌的新发病例中,有约75%的患者为非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC),其治疗上主要是保留膀胱的治疗,复发率较高;而约25%的患者为肌层进展性膀胱癌(MIBC),多采用多种方法的综合治疗手段,但预后较差。因此筛选新的膀胱肿瘤生物学标志物,为进一步阐明膀胱癌发生、发展的分子机制,对膀胱癌的预防,诊断及治疗有重要意义。SOX7作为SOX家族重要的成员之一,参与多个胚胎发育进程。目前越来越多的研究证明,SOX7在多种肿瘤的发生、发展中发挥重要的作用,参与肿瘤的免疫,血管形成,迁移及侵袭等,其更多的是作为一种抑癌基因在肿瘤中发挥作用。依据目前的研究情况,有理由说明SOX7在恶性肿瘤的发生、发展中发挥重要的作用,而膀胱癌的发生、发展中SOX7是否发挥作用,目前国内外鲜有报道,本研究的目的是探讨SOX7在膀胱癌中表达情况,研究SOX7在膀胱癌的增殖,迁移、侵袭中的作用;以及在膀胱癌细胞上皮间质转化的潜在分子机制。方法通过实时逆转录聚会酶链式反应(q RT-PCR),蛋白印迹实验(Western Blot),检测SOX7在膀胱癌组织,癌旁组织,膀胱癌细胞系及对照的永生尿路上皮细胞中的表达情况,运用膀胱癌组织及癌旁组织的免疫组化,来检测SOX7在膀胱癌组织中的表达情况,通过分析膀胱癌组织芯片的的临床病例质料,分析SOX7在膀胱癌中的表达与膀胱癌的预后情况。通过过表达SOX7的慢病毒感染膀胱癌细胞系,并用嘌呤霉素筛选出稳转株,使SOX7的表达较对照组的表达增高,另外通过用瞬时转染si-RNA,使T24细胞的SOX7表达较对照组表达下调。运用CCK-8实验、平板克隆形成实验检测过表达SOX7和敲低SOX7对膀胱癌细胞的增殖影响,用细胞划痕实验、Transwell小室实验来检测过表达SOX7和敲低SOX7对膀胱癌细胞迁移、侵袭的影响。另外用过表达SOX7的稳转株膀胱癌细胞接种在裸鼠上,观察细胞的生长情况。用Western Blot实验检测过表达SOX7和敲低SOX7后对上皮细胞间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,并用Western Blot检测过表达和敲低SOX7后对Wnt信号通路的影响。结果通过q RT-PCR,Western Blot实验,组化免疫组化证实SOX7在膀胱癌中的表达较癌旁正常组织中的表达明显下调,同时,SOX7在膀胱癌细胞系(UMUC3,5637,T24,J82)中的表达较正常的尿路上皮细胞系(SV-HUC-1)也明显下调。SOX7与膀胱癌的预后相关,高表达SOX7组较低表达组预后较好,尤其与膀胱癌的T分期,分级以及肿瘤的大小密切相关。过表达SOX7后可以发现膀胱癌细胞的增殖,迁移,侵袭能力下降,相关的EMT标志蛋白E-cadherin表达明显升高,而Ncadherin蛋白和Vimentin蛋白的表达下调,敲低SOX7后可以发现结果相反,即细胞的增殖,迁移,侵袭能力升高,E-cadherin蛋白表达下降,而N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白的表达上调。裸鼠成瘤实验可以发现膀胱癌细胞过表达SOX7后,所成瘤体体积较对照组都明显减少。通过Western Blot实验可以发现SOX7在膀胱癌中的表达与β-catenin成负相关。结论SOX7在膀胱癌中低表达,作为抑癌基因在膀胱癌的发生、发展过程中抑制EMT进程,并且通过wnt/β-catenin信号通路来抑制膀胱癌EMT的进展。SOX7可能是膀胱癌的潜在生物学标志物,在膀胱癌发生、发展中发挥重要作用,是膀胱癌预防、诊断及治疗潜在靶点。
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