深低温冻存胃癌样本的核酸与蛋白质质量控制研究

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目的:肿瘤生物样本库建设已经成为各大医疗中心、行业协会非常关注的项目,我国生物样本库起步较早,部分样本库中低温库存样本超过10年已不罕见。为了为规范性生物样本收集、储存与利用提供科学依据,本文报道了上海瑞金医院胃肠肿瘤生物样本库库存不同年限(0~10年以上)胃癌生物样本的核酸与蛋白质的质量控制分析报告。并选择分子生物学常用基因或已报道在肿瘤中呈高表达基因作为候选因子,分析这些候选基因的核酸与蛋白质表达状况,以期为高质量生物样本库建设以及肿瘤转化医学研究提供参考。  材料与方法:随机抽取瑞金医院胃肠肿瘤样本库中2003年至2014年间库存手术切除胃癌标本24对共48份。通过1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA与RNA纯度及完整性,RNA完整性检测增加了RIN值评估法;采用 BCA法检测样本蛋白质浓度,考马斯亮蓝法测定蛋白质分子的完整性。采用Realtime-PCR检测组织中UBE2C/UBCH10的表达情况;从活性水平验证蛋白质的GAPDH、β-ACTIN和 UBE2C/UBCH10的表达情况,并比较其活性差异。  结果:我们将组织标本按年限分成四组,分别为<2年、3-5年、6-8年、>9年进行比较分析,样本DNA完整性各组之间无统计学差异(P>0.05),但正常胃组织的DNA降解程度比胃癌组织重(P=0.023);比较四组之间RIN值显示,低温冻存>9年组RIN值比6-8年组和<2年组均有明显下降(P=0.00),保存6-8年组比<2年组也有明显下降(P=0.018);各组织间在蛋白质浓度上没有显著差异,但在考马斯亮蓝法测定蛋白质分子条带上存在显著差异,冻存超过9年组仅有低分子量(平均36.5KD)少量条带,冻存6-8年组在中等分子量处(平均值65.63KD)可见条带,冻存3-5年组在高分子量(平均127.5KD)可见条带,冻存短于2年组在最大分子量指示剂处(平均值160KD)仍可见条带。候选基因UBE2C/UBCH10在RNA及蛋白表达上,冻存5年以上组较5年以内组均有所下降(P<0.05,P=0.00);β-ACTIN蛋白表达上>9年组与其它3组相比明显减弱(P<0.01),6-8年组明显低于<2年组(P<0.05);GAPDH蛋白表达各组之间没有显著性差异(P>0.05)。  结论:长期低温冻存对DNA影响最小,但超过5年样本的RNA存在严重降解,且样本的大分子量蛋白质存在降解,而中小分子量蛋白质仍有部分保存。
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