目的:（1）探究PML-V型蛋白的稳定性和其泛素化修饰,以及PML-V型蛋白参与急性早幼粒细胞白血病（APL）对三氧化二砷（As₂O₃）敏感性调控的分子机制。（2）阐明PML-V型蛋白的表达水平与As₂O₃诱导PML-RAR?融合蛋白降解速率的关系,以及APL细胞株NB4细胞中PML-V型蛋白的表达水平与PML核小体结构的关系。（3）探究PML-V基因的C端序列7ab区域对PML-V型蛋白功能的影响。（4）探究APL患者体内PML-V/PML型基因含量比值,并结合患者病程进展,以期对APL患者制定个体化给药方案。方法:（1）同源重组法构建各缺失或突变的质粒。（2）免疫印迹法检测各蛋白在核质（RIPA裂解液的可溶部分）及核基质（RIPA裂解液的不可溶部分）中的表达。（3）免疫荧光法检测各蛋白在细胞中表达及形态变化。（4）免疫共沉淀法检测蛋白-蛋白相互作用。（5）荧光定量PCR法检测基因的m RNA水平变化。（6）慢病毒转染法构建稳转细胞系。（7）脂质体介导法将目的基因导入细胞内。结果:（1）在PML蛋白的7种亚型,PML-V型蛋白降解速度最快,蛋白半衰期最短,蛋白稳定性最低,泛素化修饰能力最强,且对As₂O₃最为敏感。（2）当PML-V型蛋白表达水平升高时,As₂O₃诱导的PML-RARα融合蛋白降解速率加快。与此同时,对于NB4细胞而言,PML-V型蛋白含量升高还能致使PML核小体结构由弥散状态转变为聚集状态的PML核小体。（3）PML-V型蛋白C端的7ab区域突变或缺失,会导致蛋白半衰期延长,蛋白稳定性降低,对砷剂的敏感性降低,泛素化修饰减弱甚至于完全消失,且As₂O₃诱导的PML-RARα融合蛋白降解的现象随之消失。（4）与正常人相比,APL患者体内PML-V型蛋白的表达量低,且PML-V型蛋白表达水平与PML-RARα融合蛋白表达水平呈负相关,即PML-V型蛋白表达量高时PML-RARα融合蛋白表达量相对较低,反之同理。当前,临床上通用的干扰素α不仅能促进NB4细胞中内源性PML-V型蛋白的表达,从而使PML核小体由弥散状态转变为聚集状态。结论:由前期数据可得,PML-V型蛋白在七种PML蛋白亚型中,其蛋白半衰期最短,蛋白稳定性最低,泛素化修饰最强,并且对As₂O₃最敏感。PML-V型蛋白表达升高会加快As₂O₃诱导的PML-RARα融合蛋白的降解,并恢复PML核小体从弥散状态转变为正常状态的PML核小体。当PML-V型蛋白7ab区域突变或缺失时,PML-V型蛋白会丧失其正常的生物学功能。因此,PML-V型蛋白C-端序列7ab区域对于维持其正常的生物学功能以及砷剂诱导PML-RARα融合蛋白降解发挥至关重要的作用。另外,从患者的血液样本分析了治疗效果与PNL-V之间的相关性,发现PML-V型蛋白表达相对量高的APL患者,病情较轻,砷剂治疗后缓解较快;相反,PML-V型蛋白表达量相对较低的APL患者,病情较重,缓解较慢。