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卵巢癌是严重威胁妇女健康的常见恶性肿瘤,死亡率在女性生殖器恶性肿瘤中占第1位。由于难于早期发现,近15年来,在手术和辅助化疗的综合治疗下,卵巢癌患者5年生存率一直徘徊于30%～50%之间。卵巢癌对铂类化疗药物的耐药是影响化疗效果,造成肿瘤复发、转移及死亡率高居不下的重要原因。明确卵巢癌耐药的分子机制,寻找有效的耐药逆转剂或有效的治疗靶标已成为国内外妇科肿瘤学界密切关注的研究热点。脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease,APE1)又称氧化还原因子-1(redox factor-1,ref-1)它是人类细胞中唯一修复DNA AP位点的核酸内切酶,并能通过氧化还原机制调节多种转录因子的DNA结合活性及下游靶基因表达。受其调控的转录因子包括与细胞增殖、分化、转化和凋亡相关的重要因子,如NF-κB,AP-1,p53等。而这些转录因子与肿瘤放化疗抵抗密切相关。本研究应用免疫组织化学技术检测卵巢上皮性癌初治患者手术切除标本和卵巢癌顺铂敏感株A2780细胞、顺铂耐药株CP70细胞中APE1的表达,分析APE1与卵巢癌铂类耐药之间的关系,应用siRNA技术,观察抑制APE1表达对卵巢癌细胞化疗敏感性的影响,探讨APE1参与卵巢癌细胞耐药的机制,为卵巢癌逆转铂类耐药性提供有价值的实验依据。研究目的1.探讨APE1基因在卵巢上皮性癌中的表达与临床病理因素及铂类耐药之间的关系,以确证APE1为卵巢癌治疗潜在的分子靶点;2.探讨以APE1基因与卵巢癌铂类耐药的相关性及其在卵巢癌铂类耐药机制中的作用;3. APE1基因“敲除”对卵巢癌细胞耐药性的影响及其作用机制。研究内容和方法1.采用免疫组化检测卵巢上皮性癌组织APE1蛋白表达,分析APE1表达与卵巢癌临床病理因素的关系。2.免疫组化、western blot检测卵巢癌顺铂敏感株A2780细胞、顺铂耐药株CP70细胞中APE1蛋白表达及定位情况;western blot检测顺铂处理后A2780和CP70细胞中APE1蛋白表达及定位的变化,分析APE1表达与卵巢癌铂类耐药性的相关性。3. MTT法检测Ad5/F35-APE1 siRNA瞬时转染抑制APE1蛋白表达后A2780和CP70细胞对顺铂化疗敏感性的改变;TUNEL法检测抑制APE1蛋白表达对顺铂诱导的A2780和CP70细胞凋亡影响。研究结果1.卵巢上皮癌组织APE1表达与病理类型、细胞学分级等肿瘤的恶性生物学行为有关(P<0.05)。APE1表达强度和亚细胞定位均与以铂类为基础化疗的药物敏感性相关。2. CP70细胞的APE1蛋白表达的水平较A2780细胞高,A2780细胞中APE1表达以核表达为主,而在CP70细胞中呈核浆共表达。顺铂处理A2780和CP70细胞后,APE1蛋白表达呈剂量和时间依赖性增强。3. Ad5/F35-APE1 siRNA对卵巢上皮性癌顺铂化疗敏感性的影响:(1)感染Ad5/F35-APE1 siRNA后,两种卵巢癌细胞对顺铂的敏感性明显增强。40MOI的Ad5/F35-APE1 siRNA感染细胞后,A2780细胞和CP70细胞IC50分别为6.60μM和39.73μM,较对照组分别下降了61.89%和41.47%。(2)Ad5/F35-APE1 siRNA感染A2780细胞和CP70细胞后,顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡明显增多。Ad5/F35-APE1 siRNA 40MOI时,A2780细胞和CP70细胞凋亡指数为(42.16±3.61)%和(36.11±3.81)%,分别是DDP组的3.57倍、3.87倍,有显著差异(p<0.01)。结论1. APE1表达水平和亚细胞定位与卵巢癌的发生发展密切相关, APE1对卵巢癌的铂类化疗敏感性和预后有一定提示作用。2. APE1在顺铂敏感细胞和耐药细胞中蛋白表达强度和亚细胞定位不同,顺铂诱导卵巢癌细胞APE1蛋白表达呈剂量和时间依赖性增强,提示APE1在卵巢癌顺铂耐药形成机制中发挥重要作用。3.抑制APE1蛋白表达能一定程度增强卵巢癌细胞对顺铂化疗的敏感性,其机制与抑制癌细胞DNA修复和通过氧化还原调控凋亡途径调控有关。APE1可能为逆转卵巢癌铂类耐药的有效靶点。