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二化螟(Chilo suppressalis) (Lepidoptera:Pyralidae)是分布于亚洲、中东和欧洲南部的重要水稻害虫。目前,对二化螟的防治主要依赖于化学农药,但随着化学农药的不合理使用,二化螟已对三唑磷、杀虫单、氟虫腈等常用杀虫剂产生不同程度的抗性。氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)是美国杜邦公司开发的邻甲酰氨基苯甲酰胺类新型杀虫剂,对鳞翅目害虫具有卓越的杀虫活性。自从2008年进入中国市场后,氯虫苯甲酰胺已经被广泛用于防治包括二化螟在内的鳞翅目害虫。本文研究了氯虫苯甲酰胺对二化螟生长发育、生殖和温度耐受性的亚致死效应。研究结果对于进一步深入了解杀虫剂亚致死效应机制以及科学合理使用氯虫苯甲酰胺具有重要的理论意义和实践价值。采用饲料混毒法,确定了氯虫苯甲酰胺对二化螟3龄幼虫的亚致死浓度(LC1o和LC30),并研究其对二化螟生长发育的影响。结果表明,经氯虫苯甲酰胺LC1o和LC30处理的幼虫从3龄到6龄的发育时间(16.15天和17.14天)与对照(14.80天)相比显著推迟,并且LC30处理后从蛹到成虫的发育历期(9.03天)与对照(6.66天)相比显著延长,但LC1o处理对蛹到成虫的发育历期(7.05天)无显著影响。经LClo和LC30处理的雄成虫寿命与对照相比显著缩短,但雌成虫的寿命没有显著变化。LC1o和LC30处理组幼虫体重(5.72 mg和3.40mg)显著低于对照(12.47 mg)。LC1o和LC30处理组雄蛹重(46.74 mg和44.94 mg)显著低于对照(50.49 mg),LC30处理组雌蛹重(49.31 mg)也显著低于对照(59.79 mg),但LC1o处理组雌蛹重没有显著变化。另外,LC1o和LC30处理组化蛹率(41.30%和23.98%)显著低于对照(71.86%),但成虫羽化率没有显著变化。与对照相比,LC1o和LC30处理组雌虫产卵量分别下降了32.18%和52.94%,但雌虫百分率及卵孵化率与对照相比没有显著差异。利用RT-PCR和RACE技术克隆了二化螟卵黄原蛋白基因5,732 bp全长cDNA (CsVg)。CsVg开放阅读框长5373 bp,编码1790个氨基酸残基,预测蛋白质分子质量为204.63 kDa。序列分析发现CsVg具有Vitellogenin-N结构域(pfam01347,32-742位氨基酸),DUF1943结构域(pfam09172,775-1056位氨基酸)和VWD结构域(pfam000940,1460-1626位氨基酸)。酶切位点RVRR位于氨基端362-365位氨基酸,两个多聚丝氨酸区分别位于334-345和387-397位氨基酸。多重序列比对发现CsVg与稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis (AEM75020)、棉铃虫Helicoverpa armigera (AFV40972)、斜纹夜蛾Spodoptera litura (ABU68426) Vg基因的氨基酸序列一致性分别为59%,52%,50%。此外,CsVg羧基端DGXR (1591-1594)和GL/ICG (1608-1611)基序以及6个半胱氨酸残基在二化螟和其它鳞翅目昆虫中也高度保守。应用RT-qPCR对CsVg瞻表达模式分析发现,CsVg在雌蛹和雌成虫各个发育阶段都有表达,随着蛹期发育表达水平逐渐上升,在羽化12h的雌虫中表达水平达到高峰,羽化24h后表达水平显著下降。经LC10和LC30浓度氯虫苯甲酰胺处理后,羽化12h的雌成虫CsVg的表达水平与对照相比分别显著降低了42.52%和47.84%。经LC30浓度氯虫苯甲酰胺处理的羽化24h的雌虫CsVg的表达水平也显著降低,但经LC1o浓度氯虫苯甲酰胺处理的羽化24h的雌虫CsVg的表达水平与对照相比无显著差异。氯虫苯甲酰胺对二化螟温度耐受性的亚致死效应研究发现,LC10和LC30浓度氯虫苯甲酰胺处理的幼虫经过LT50热激后,处理组二化螟幼虫的死亡率显著高于对照组。进一步研究了亚致死浓度氯虫苯甲酰胺对二化螟热激蛋白基因和精氨酸激酶基因CsAg表达水平的影响。经42℃热激后,LC10和LC30氯虫苯甲酰胺处理组幼虫hsp60和hspl9.8的mRNA表达水平显著升高,其中hsp60的mRNA表达水平分别是对照的2.05和2.13倍,hsp19.8的mRNA表达水平分别是对照的1.92和2.56倍。LC10氯虫苯甲酰胺处理组幼虫hsp70和hsp21.7a的mRNA表达水平显著高于对照,分别为对照的2.27倍和2.24倍。LC10和LC30氯虫苯甲酰胺处理组幼虫hsp90、hsp21.7b、hsp21.4和hsp21.5的mRNA表达水平较对照均无显著差异。对CsAg基因的研究发现,经42℃热激后,LC10和LC30氯虫苯甲酰胺处理组幼虫CsAg的mRNA表达水平较对照分别降低33.12%和62.01%。