葡萄原花青素(GPC)是一种来源广泛且有代表性的植物多酚,在葡萄皮、籽中含量尤为丰富,其中葡萄籽中含量约为1%。国内外大量研究表明GPC在抗氧化、细胞保护等方面发挥重要作用,其多种独特的生理功能已引起家禽从业者的关注,并在家禽养殖中的应用渐多。球虫病是肉仔鸡的常见多发的疾病,严重威胁禽业健康发展;其主要引起氧化应激、免疫抑制和肠道损伤等症状。本论文旨在研究GPC营养调控肉仔鸡球虫感染的作用及机理,主要包括体外抗氧化和免疫性能评价试验、有效性饲养试验、球虫攻毒试验三部分。试验一:体外评价葡萄原花青素抗氧化活性和免疫调节性能本试验旨在体外评价GPC的抗氧化活性和免疫活性,为其在肉仔鸡日粮中添加提供依据。本试验分为体外抗氧化和体外免疫细胞评价两部分。体外抗氧化活性评价:分别对0.5 mg/m L叔丁基对苯二酚(TBHQ)、0.5 mg/m L维生素C(Vitamin C)、0.1 mg/m L葡萄原花青素(GPC)、0.5mg/m L GPC、1.0 mg/m L GPC 5个样品,进行总还原能力,和清除超氧阴离子自由基、羟自由基和二苯基苦基苯肼(DPPH)能力测定,评价5个样品抑制自发、过氧化氢(H2O2)诱导和亚铁离子-维生素C(Fe2+-Vitamin C)诱导三个体系下脂质氧化能力。结果显示,总还原能力与清除超氧阴离子和羟自由基能力趋势表现为:0.5 mg/m L TBHQ>0.5 mg/m L VC>0.1 mg/m L GPC>0.5 mg/m L GPC>1.0 mg/m L GPC,就清除DPPH自由基能力而言,反应5和10 min后,其能力强弱和反应速率趋势为:0.5 mg/m L TBHQ<0.1 mg/m L GPC<0.5 mg/m L GPC<1.0 mg/kg GPC<0.5 mg/m L VC。反应15 min后,其能力趋势和反应速率为:0.5 mg/m L TBHQ<0.1 mg/m L GPC<0.5 mg/m L GPC<0.5 mg/m L VC<1.0 mg/kg GPC;在抑制不同体系的脂质氧化方面,0.5 mg/m L GPC具有较好的作用。体外免疫细胞评价:选取0、0.24、1.2、6.0、30、150μg/m L 6个终浓度的GPC,研究其对肉仔鸡外周血淋巴细胞和肠道γδT细胞增殖效果的研究。结果显示,GPC在6-30μg/m L时对淋巴细胞增殖有显著的促进效果(P<0.05),且其最佳浓度为30μg/m L。综上所述,GPC具有良好的抗氧化能力,在清除自由基和抑制脂质氧化方面表现较佳;GPC在6-30μg/m L剂量时促进肉仔鸡淋巴细胞的增殖。试验二:葡萄原花青素对肉仔鸡生产性能和免疫机能的影响本试验旨在研究GPC对肉仔鸡生产性能和免疫机能的影响。选用240只1日龄科宝-500(Cobb-500)肉仔鸡健康公雏,随机分为4组,每组6个重复,每个重复10只鸡,分别采食添加0 mg/kg(对照)、7.5 mg/kg、15 mg/kg或30 mg/kg GPC的小麦-豆粕型饲粮。试验期42天。结果表明:1)GPC显著降低0-6周龄肉仔鸡的采食量(P<0.05),提高饲料效率;其降低采食量的作用主要在22-42日龄,7.5 mg/kg、15 mg/kg GPC可显著改善生长后期饲料效率(P<0.05);2)7.5mg/kg GPC显著提高肉仔鸡42日龄胸腺指数(P<0.05),30 mg/kg GPC显著提高21日龄胸腺指数和42日龄胸腺指数、脾脏指数(P<0.05);3)7.5 mg/kg GPC对肉仔鸡42日龄(T/B)淋巴细胞体外增殖有显著促进作用,15 mg/kg GPC、30 mg/kg GPC分别提高了42日龄T、B淋巴细胞转化率(P<0.05);4)7.5 mg/kg GPC有提高肉仔鸡21日龄外周血γδT细胞亚群比例的趋势(P>0.05),可显著提高42日龄单核吞噬细胞吞噬指数(P<0.05);5)15 mg/kg GPC可显著提高肉仔鸡21、42日龄血液溶菌酶浓度(P<0.05),30 mg/kg GPC仅可极显著提高肉仔鸡21日龄血液溶菌酶浓度(P<0.01),同时显著降低肉仔鸡42日龄碳粒廓清指数和吞噬指数(P<0.05)。因此,适量(7.5mg/kg-15 mg/kg)GPC可改善肉仔鸡生长性能,提高免疫机能。试验三:葡萄原花青素对肉仔鸡屠宰性能、肠道形态和血液指标的影响本试验旨在研究GPC对肉仔鸡的屠宰性能、肠道形态和血液指标的影响。选用280只1日龄科宝-500(Cobb-500)肉仔鸡健康公雏,随机分为4组,每组7个重复,每个重复10只鸡,分别采食添加0 mg/kg(对照)、7.5 mg/kg、15 mg/kg或30 mg/kg GPC小麦-豆粕型饲粮。试验期42天。结果表明:GPC的添加显著提高了肉仔鸡42日龄的胸肉率,并降低了21日龄和42日龄的空肠隐窝深度,提高绒毛高度/隐窝深度比值,7.5和15 mg/kg GPC表现较好;15 mg/kg GPC显著提高了肉仔鸡21和42日龄总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,7.5 mg/kg GPC提高了肉仔鸡42日龄的T-SOD活性,并降低了丙二醛(MDA)含量,但30 mg/kg GPC与对照组相比,在抗氧化性能方面无显著提高;30 mg/kg GPC显著提高了21日龄碱性磷酸酶(ALP)和42日龄丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,以及21日龄、42日龄肉仔鸡的肌酐。总而言之,7.5和15 mg/kg GPC可提高了肉仔鸡胸肉率、改善回肠肠道形态,提高机体抗氧化机能,而30 mg/kg GPC对肉仔鸡血液生化代谢有不良影响。试验四:葡萄原花青素对感染球虫肉仔鸡的影响本试验旨在探究GPC对感染柔嫩艾美尔球虫肉仔鸡的生长性能、免疫机能和抗氧化状态的影响。选用350只1日龄科宝-500(Cobb-500)健康公雏,随机分为5个处理,分别为空白对照组(0mg/kg GPC)、负对照组(0 mg/kg GPC)、7.5 mg/kg GPC组、15 mg/kg GPC组和30 mg/kg组。每个处理7个重复,每个重复10只鸡。试验期42天。14日龄时,负对照组和GPC剂量组每只肉仔鸡经口腔攻毒5×104球虫卵囊,空白对照组每只肉仔鸡灌服同体积生理盐水。结果显示:①GPC对攻毒前(1-14日龄)肉仔鸡生长性能无显著影响,攻毒后(15-21日龄),攻毒球虫对照组显著降低了ADG,GPC添加组的ADG也有不同程度降低,但与负对照组相比未见显著差异;22-42日龄,7.5和15 mg/kg GPC显著提高了球虫感染后肉仔鸡的ADG,30 mg/kg GPC显著降低了ADFI。GPC添加显著改善了球虫感染后的饲料效率;就整个生长期而言,7.5和15 mg/kg GPC显著提高球虫感染肉仔鸡的生长性能,尽管21日龄较未攻毒组替体重轻,42日龄时体重恢复;②GPC显著降低了肠道损伤评分、血便堆数和卵囊排出数(P<0.05);③球虫感染显著降低了抗氧化水平;与攻毒球虫对照组相比,GPC添加组显著提高了总抗氧化能力(T-AOC)和T-SOD、过氧化氢酶(CAT)活性,显著降低了MDA的含量(P<0.05),其中7.5和15 mg/kg GPC效果较好;GPC的添加显著降低了因球虫感染引起的NO水平和i NOS活性的提高(P<0.05);球虫感染升高了肉仔鸡血浆中溶菌酶活性显著提高,与攻毒对照组相比,不同剂量的GPC尽管有所提高,但差异不显著;④GPC添加组显著抑制了球虫感染引起的脾脏指数增加;肉仔鸡的胸腺指数和法氏囊指数不受球虫感染或日粮GPC影响;GPC各剂量组均提高了球虫攻毒肉鸡外周血T淋巴细胞转化率,7.5和15 mg/kg GPC剂量组尚可提高球虫攻毒后外周血B淋巴细胞转化率;球虫入侵显著提高了血液中γδT细胞比例(P<0.05),GPC的添加有进一步提高血液中γδT细胞比例的趋势;⑤球虫感染显著引起回肠上皮淋巴细胞数量的增加和盲肠黏膜s Ig A水平提高,GPC进一步提高了肠道免疫状态。综上所述,GPC可提高球虫感染后肉仔鸡的抗氧化性能和免疫机能,并显著抵抗球虫感染引起的炎症反应,从而缓解球虫感染造成的生长抑制。其中7.5-15 mg/kg GPC抗球虫效果较好。本研究首先体外评价了GPC的抗氧化特性和促免疫机能;之后给正常饲养的肉仔鸡饲喂GPC,探讨了其对肉仔鸡的影响,得出了其适宜添加剂量;最后通过抗球虫感染试验,探讨了GPC抗球虫的效果及相关作用机理。研究发现,GPC具有良好的抗氧化和促免疫活性,GPC可以通过抑制氧化应激和促进免疫性能,抑制球虫感染。