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1987年,Pariza等首次发现共轭亚油酸(CLA)具有抗癌功能。此后,世界各国的研究人员相继发现了CLA还具有降低脂肪沉积、抗动脉硬化、提高免疫功能、促进骨生成等功能。CLA广泛的生理活性,使得它在医药、食品、农业、化妆品等行业可以得到广泛开发。然而,CLA为液态原料,不易工业运输、添加与应用。因此,有必要改良CLA的形态或是开发CLA衍生物,以利于将共轭亚油酸开发成营养食品、保健食品、营养强化剂、食品添加剂、饲料添加剂、药物中间体或药品等。
现今,人工制备CLA主要有两大类方法:一种是通过化学方法合成CLA,另一种是通过微生物生物转化获得。在商业上主要是以富含亚油酸的植物油经化学改造而合成CLA。中药红花籽油是已知植物油中亚油酸含量最高的植物油。因此,本论文使用的共轭亚油酸钙盐是以红花籽油为原料,经过结构改造与分子蒸馏纯化工艺精制而得到的CLA,再利用碱性催化异构合成而来。
共轭亚油酸钙是通过共轭亚油酸皂化后与钙盐反应产生的,是一种新型的保健品、食品添加剂以及能量饲料添加剂。由于共轭亚油酸钙是由脂肪酸和钙离子结合形成的保护性油脂,因此可作为一种动物饲料添加剂。其特点是能量浓度高;不干扰瘤胃内微生物活动;补充能量的同时还可以补充钙离子;有效缓解高产奶牛能量负平衡等。共轭亚油酸钙盐是通过共轭亚油酸脂肪皂化反应产生的粉末状固型共轭亚油酸衍生物。相较于液态的共轭亚油酸,共轭亚油酸钙盐更易于工业运输、添加与应用,可开发为药品、保健食品、功能食品、食品添加剂等。新型功能性添加剂——共轭亚油酸钙盐在药品工业、食品工业以及饲料工业中将具有广阔的市场前景。
主要内容包括以下四个方面:
(1)共轭亚油酸钙制备工艺优化:以分子蒸馏纯化新工艺生产的CLA为基础,通过正交试验设计,优化共轭亚油酸钙加工工艺,发现超碱量为20%、超盐量10%、皂化温度60℃、皂化时间1h、用水量为油重的8倍时,共轭亚油酸钙盐得率最高。随后,在中试条件下,利用小试最优化条件生产出最终得率为75.40%的共轭亚油酸钙。本试验为产品的工业化提供了生产工艺,为大规模化生产提供了优化数据。
(2)质量控制与质量标准研究:为了有效地评价共轭亚油酸钙盐的质量,本论文利用了GC-MS测定共轭亚油酸钙盐中脂肪酸的含量;并评价了主要的质量控制项目:水分及挥发物、钙含量、脂肪酸含量测定(CLA%)等。本标准利用简易而可靠的检验方法,增强了其标准的可操作性,为制订其质量控制标准提供了参考。以性状、重量差异、含量测定、成分变化为主要考察指标,对共轭亚油酸钙盐进行了初步稳定性研究。结果表明,高温、高湿度或高光照度的环境对CLA稳定性都有一定影响,而高温的影响最大。经过6个月的真空包装的长期试验,发现共轭亚油酸钙盐的性状、含量并没有明显变化,说明共轭亚油酸钙盐需要特殊包装才能长期保存。
(3)共轭亚油酸及其钙盐对奶牛营养调控的影响:本试验的目的是研究日粮中添加不同共轭亚油酸及其衍生物对中国荷斯坦奶牛生产性能、乳脂中脂肪酸含量以及奶牛营养调控的影响。选用9头泌乳荷斯坦奶牛,采用3×3拉丁方设计,分为3组,对照组、CLA钙盐组和游离CLA组。试验进行12周,分为3个周期;每个周期第1周为适应期,后3周为试验期。日粮中添加游离CLA有降低奶产量和采食量的趋势,而添加CLA钙盐没有影响。日粮中添加CLA钙盐和游离CLA能够显著降低乳脂率和乳脂产量,但不影响其它乳成分。CLA钙盐和游离CLA组的乳脂率与乳脂产量随着时间的增加而减少,但乳脂中c9t11CLA和t10c12CLA的含量随着饲喂时问的增加而增加,而后在第6或第7天都达到峰值,随后保持稳定。对乳脂脂肪酸产量的分析,发现饲喂CLA及其钙盐不仅降低乳脂中从头合成的脂肪酸产量,而且同样降低乳脂中源自于循环系统的脂肪酸。同时发现饲喂CLA钙盐和游离CLA都显著抑制△9去饱和酶活性。结果表明,不同形态CLA都能引起奶牛乳脂抑制,但由于粉末状CLA钙盐不影响采食量,方便添加,所以,建议在奶牛生产中添加CLA钙盐。
(4)共轭亚油酸钙盐对热应激奶牛的影响:试验的目的是研究日粮中梯度添加CLA钙盐对奶牛抗热应激的影响。选用36头泌乳荷斯坦奶牛,采用完全随机区组设计,分为4组,试验奶牛分别饲喂基础日粮(Control)、基础日粮+100gCLA钙盐(CLA-1)、基础日粮+200gCLA钙盐(CLA-2)或基础日粮+400gCLA钙盐(CLA-3)。试验进行6周,预试期2周,正式试验期4周。饲喂CLA钙盐不会影响奶牛的采食量、乳蛋白以及乳糖,但会极显著降低(P<0.01)乳脂率和乳脂产量。饲喂CLA钙盐会降低乳脂中各个脂肪酸的产量,而增加了t10c12LA的产量。与对照组比较,CLA-2组的奶牛呼吸率明显(P<0.05)下降,所有CLA组的奶牛肛温也极明显降低(P<0.05)。而血液指标中,在CLA-2和CLA-3组的奶牛中,甲状腺素的浓度显著(P<0.05)升高,而肌酸激酶浓度降低(P<0.05),天冬氨酸转氨酶浓度也显著下降(P<0.01)。另外,这两组中的奶牛血浆K、Ca、Na和Cl离子的浓度要高于(P<0.05)对照组。因此,饲喂CLA钙盐100g/d对热应激奶牛几乎没有效果,但饲喂CLA钙盐200或400g/d可以通过调节体温和影响血浆中的酶类、电解质和激素而缓解处在热应激中的奶牛,而且与饲喂时间有关。
因此,本研究初步筛选出较优的生产共轭亚油酸钙盐的加工工艺参数,降低生产成本,有利于大规模推广应用;对共轭亚油酸钙盐进行了质量研究、初步稳定性研究,初步建立了共轭亚油酸钙盐的质量标准,为国家与企业评价共轭亚油酸钙盐的质量提供了依据;并观察共轭亚油酸钙盐对奶牛的营养调控和抗热应激的影响,为奶牛抗热应激找到了新的途径,为大规模推广应用提供基础数据,更有利于奶牛养殖业的发展。