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背景:micro RNAs(mi RNAs)是一类在转录后水平负调基因表达的非编码小RNA分子,已有研究表明mi RNAs与凋亡关系密切。anisomycin由链霉菌(Streptomyces griseolus)分泌,能与60S核糖体中亚单位28S r RNA结合并阻断肽键形成,从而阻止肽链延长和导致多核糖体降解。此前本课题组已筛选并鉴定出在anisomycin诱导人类急性T淋巴细胞性白血病(Jurkat T)细胞凋亡中显著差异表达的mi RNA let-7c。然而,let-7c被anisomycin刺激表达上调后,它是如何介导Jurkat T细胞凋亡的以及与JNK通路是否存在关联尚不清楚。目的:深入阐明mi RNA let-7c(let-7c)在anisomycin诱导Jurkat T细胞凋亡中的作用与可能机制,以期为anisomycin临床应用于治疗白血病提供理论基础和实验依据。方法:建立anisomycin体外诱导Jurkat T细胞凋亡的模型。anisomycin处理细胞前加入JNK信号通路特异性阻断剂SP600125,q PCR检测let-7c的变化,以探明JNK信号与let-7c之间是否存在关联;通过分别转染let-7c-mimic、let-7c-inhibitor和let-7c过表达载体,结合流式细胞术分析let-7c在anisomycin诱导Jurkat T细胞凋亡中的作用,用Western Blot观察let-7c对凋亡相关转录因子AP-1、P-AP-1、STAT1、P-STAT1、STAT3、P-STAT3和凋亡相关蛋白Bim、P-Bim、Bcl-x L、P-Bcl-x L表达的影响,以确定anisomycin是否通过let-7c影响这些凋亡相关因子;进一步采用RT-PCR、q PCR和Western Blot确证let-7c与Bim和Bcl-x L的关联;再利用si RNA技术沉默Jurkat T细胞中的bim基因,结合流式细胞术、q PCR和Western Blot确证Bim是否在let-7c介导anisomycin诱导Jurkat T细胞凋亡中发挥作用;最后,通过Western Blot和原位免疫荧光染色观察Bim能否影响Jurkat T细胞中活化的Bax和Bak的表达与分布,以弄清Bim激活的下游分子及其作用。结果:anisomycin显著上调mi RNA let-7c的表达,但是这种作用可被JNK通路阻断剂SP600125部分逆转。anisomycin明显增加Jurkat T细胞早期凋亡和晚期凋亡细胞比例,转染let-7c-mimic或let-7c过表达载体均可发挥类似的促凋亡作用,而转染let-7c-inhibitor可部分逆转anisomycin诱导的凋亡。let-7c-mimic、let-7c过表达或anisomycin都能上调P-AP-1和P-STAT1蛋白水平,而anisomycin的上调作用可被let-7c-inhibitor部分逆转。相反,P-STAT3表达被let-7c-mimic、let-7c过表达载体或anisomycin抑制,而let-7c-inhibitor却能逆转anisomycin的抑制作用。同时,无论anisomycin还是let-7c-mimic和let-7c-inhibitor均不改变非磷酸化的AP-1、STAT1和STAT3。let-7c-mimic能够上调Bim m RNA、蛋白和磷酸化水平,而下调Bcl-x L m RNA和蛋白水平,但不影响P-Bcl-x L的表达。低敲bim基因能明显减少anisomycin诱导的Jurkat T细胞凋亡,抑制anisomycin对Bak和Bax蛋白的结构性活化,呈现active Bak和active Bax蛋白水平的降低,而非活性的Bax无变化。结论:anisomycin可能通过JNK/let-7c/AP-1/STAT1/STAT3信号通路打破促凋亡性BH3-Only蛋白Bim与抗凋亡性Bcl-2家族成员Bcl-x L之间的平衡,从而激活Bak/Bax,最终导致Jurkat T细胞的凋亡。