目的：乳腺导管内乳头状肿瘤包括一组病变：良性乳头状瘤、非典型乳头状瘤及导管内乳头状癌。由于三者的分子生物学基础、预后及临床处理存在较大差异，有必要准确区分三者。当病变不典型时往往存在鉴别诊断困难的情况，尤其是良性乳头状瘤同非典型乳头状瘤、非典型乳头状瘤同导管内乳头状癌的鉴别诊断。从形态上鉴别这两组疾病往往带有一定的主观性，并造成这两组疾病诊断重复性很差；而病理诊断的准确性直接影响手术方式的选择，手术方式对以上疾病的预后又有直接影响。随着分子生物学的飞速进展和各种高新生物技术的不断涌现，肿瘤标志物的研究已成为当今医学界研究的焦点。因而寻找可靠和实用的肿瘤标志物进行辅助诊断，早期发现癌变倾向，弥补形态学方面的缺憾，可减少因治疗不足导致的后期癌变率。根据乳腺导管内良性乳头状瘤、非典型乳头状瘤及导管内乳头状癌临床诊断和鉴别诊断中的实际问题，本研究采用免疫组化非生物素两步法fTM法、)联合检测乳腺导管内良性乳头状瘤，非典型乳头状瘤及乳头状癌中Ki-67抗原、EZrin蛋白、34βE12角蛋白及P63等在蛋白水平上的表达情况，分析其表达与乳腺导管内良性乳头状瘤、非典型乳头状瘤及导管内乳头状癌之间的相关性，探讨Ezrin、Ki-67、P63及34βE12作为肿瘤标记物在乳腺导管内乳头状肿瘤良恶性病变鉴别诊断中的价值。 材料与方法：收集邢台市肿瘤医院，金能集团总医院及邢台市第三医院2001年10月-2006年10月手术切除的3596例乳腺肿瘤，按照2003年WHO新的乳腺肿瘤与遗传学分类标准，从中挑选出导管内良性乳头状瘤30例，非典型乳头状瘤28例，导管内乳头状癌26例，均为石蜡包埋组织，共84例。所有病例术前均未行放、化疗及免疫治疗，临床资料完整，并均经病理组织学确诊。采用免疫组化非生物素两步法(TM法)联合检测肿瘤组织中Ezrin、Ki67、P63及34βE12在蛋白水平上的表达情况，分析其临床病理意义，特别是在肿瘤鉴别诊断中的意义。 结果 1．Ezrin在各种乳腺导管乳头状肿瘤中的表达情况 Ezrin蛋白阳性反应位于肿瘤细胞膜或/和细胞浆，呈棕黄色颗粒。30例良性导管内乳头状瘤中，25例Ezrin呈单纯细胞膜着色，另外5例除细胞膜阳性着色外，还可见少量细胞浆阳性着色；28例导管非典型乳头状瘤中，15例呈单纯细胞膜阳性着色，13例为细胞膜和细胞浆共同着色。而在26例导管内乳头状癌中14例。Ezrin阳性反应定位于细胞浆，核膜着色不明显。在良性乳头状瘤组、非典型乳头状瘤组、导管内乳头状癌组中Ezrin细胞浆的阳性异常表达率分别为3.3％、32.1％和53.8％。从良性乳头状瘤、非典型乳头状瘤到导管内乳头状癌．Ezrin细胞浆的阳性异常表达呈逐步递增趋势，导管内乳头状癌组中Ezrin细胞浆的异常表达率明显高于良性和非典型导管内乳头状瘤组(P<0.05)。Ezrin在细胞浆中的阳性异常表达提示其可能参与了乳腺导管乳头状肿瘤的癌变过程，可作为乳腺导管乳头状肿瘤良恶性质鉴别诊断的标记物。 2．Ki-67在各种乳腺导管乳头状肿瘤中的表达情况 Ki-67阳性免疫反应产物呈棕黄色颗粒状，定位于乳腺导管乳头状肿瘤细胞的细胞核。良性导管内乳头状瘤组、非典型乳头状瘤组和导管内乳头状癌组Ki67的阳性异常表达率分别为20.0％、42.9％和73.1％。从良性导管内乳头状瘤、非典型乳头状瘤到导管内乳头状癌Ki67的阳性异常表达呈逐步递增趋势，导管内乳头状癌组中Ki67的阳性异常表达率明显高于良性导管内乳头状瘤组和非典型乳头状瘤组(P<0.05)。 本研究结果表明，Ki67可以反映乳腺导管乳头状肿瘤的增殖程度和生物学行为，在各类乳腺导管内乳头状肿瘤的鉴别诊断中具有一定参考价值。 3．P63在各种乳腺导管乳头状肿瘤中的表达情况 P63定位于乳腺肌上皮细胞核，阳性染色为细胞核内出现棕黄色颗粒。在30例乳腺良性乳头状瘤腺体周围可见P63阳性表达的肌上皮，呈连续性分布，核着色程度强。而在28例乳腺非典型乳头状瘤及26例导管内乳头状癌的腺体周围，肌上皮细胞数目减少呈间断或不连续环状，且核着色程度弱。P63在良性乳头状瘤组、非典型性乳头状瘤组和导管内乳头状癌组中异常表达率分别为10.0％、39.3％、88.5％。P63在导管内乳头状癌组中的异常表达率较之良性导管内乳头状瘤组与非典型乳头状瘤组明显增高(P<0.05)。综上研究结果提示：P63可以作为乳腺导管内乳头状肿瘤良恶性鉴别诊断的一种良性病变标记物。 4．34βE12角蛋白在各种乳腺导管乳头状肿瘤中的表达情况 34βE12主要定位于乳腺导管乳头状肿瘤细胞膜，阳性染色为细胞膜及部分细胞质内出现棕黄色颗粒。34βE12在良性导管内乳头状瘤中主要表现为完整的细胞膜强阳性表达，细胞质有少量阳性表达；在导管内乳头状癌细胞的表达，则表现以细胞质内见阳性颗粒为主，较少见完整的细胞膜阳性，而且阳性强度也较良性病变明显减弱；在导管内非典型乳头状瘤中的表达情况则界于二者之间。34βE12在良性乳头状瘤组、非典型乳头状瘤组和导管内乳头状癌组中异常表达率分别为16.7％、53.6％、96.2％。在导管内乳头状癌中的异常表达率较之良性导管内乳头状瘤组与非典型乳头状瘤组明显增高(P<0.05)。本研究结果显示，上皮细胞出现34βE12显著异常表达时高度提示为癌。 5．乳腺导管内乳头状肿瘤Ezrin、Ki-67、34βE12与P63表达的关系 Spearman等级相关分析结果表明，Ezrin与Ki-67在乳腺导管内乳头状肿瘤中的表达呈正相关。34βE12与P63在乳腺导管内乳头状肿瘤中的表达呈正相关。 结论 1、Ezrin在乳腺导管内良性乳头状瘤、非典型乳头状瘤和乳头状癌细胞中的异常表达呈逐步递增趋势，提示其可能参与了乳腺导管乳头状肿瘤的癌变过程，可作为乳腺导管乳头状肿瘤良恶性质鉴别诊断的标记物。 2、从导管内良性乳头状瘤、非典型乳头状瘤到导管内乳头状癌Ki67的异常表达呈逐步递增趋势，表明Ki67可以反映乳腺导管乳头状肿瘤的增殖程度和生物学行为，在各类乳腺导管内乳头状肿瘤的鉴别诊断中具有一定的参考价值。 3、乳腺良性乳头状瘤腺体周围均可见连续性分布P63强阳性表达的肌上皮细胞，而乳腺非典型乳头状瘤及导管内乳头状癌的腺体周围’P63阳性肌上皮细胞数目减少，呈间断或不连续环状，且核着色程度弱。P63表达可以作为乳腺导管内乳头状肿瘤良恶性鉴别诊断的一种良性病变标记物。 4、34βE12在导管内乳头状癌细胞膜阳性表达率低，缺失率高，乳腺导管内乳头状肿瘤细胞出现34βE12表达缺失时高度提示为癌。