研究目的：分析诱导cofilin去磷酸化对肝细胞极性重建的影响及其机制。 研究方法： 1、对体外培养肝细胞cofilin去磷酸的调控：利用SSH1L转染大鼠原代培养肝细胞，调控cofilin的去磷酸化，RT-PCR、Western-blot法检测cofilin和P-cofilin，转染后SSH1L在大鼠肝细胞的表达，免疫荧光法检测质粒转染效率。 2、通过基因重组技术构建cofilin原核生物表达载体，阳性重组体转化BL21(DE3)菌株，获得cofilin蛋白质的高效表达。 3、肝细胞增殖能力与功能的检测：MTT法检测肝细胞增殖能力，生化检测仪检测肝细胞功能指标如ALT，ALB，LDH。 4、研究cofilin对肝细胞骨架及胆小管网络的调节：观察体外培养肝细胞胆小管网络的形成和维持时间，利用激光共聚焦显微镜观察细胞骨架肌动蛋白微丝空间构象，密度的改变及其与胆小管网络变化的关系。进一步观察诱导cofilin去磷酸化对胆小管网络、细胞骨架的影响。 研究结果： 第一部分：阳离子脂质体法成功将SSH1L质粒DNA转染原代培养大鼠肝细胞，转染率达到70％以上，转染后可见实验组SSH1LmRNA和蛋白质表达均明显高于对照组，实验组P-cofilin蛋白表达水平明显下降。 第二部分：成功构建cofilin-pET32高效表达质粒，获得cofilin蛋白的大量表达。 第三部分：实验组肝细胞增殖能力，ALT，ALB，LDH，生存时间，胆小管网络的形成和维持时间均优于对照组。胆小管的形成过程起始于肝细胞的极性区域，逐渐延伸、融合形成胆小管网络，微丝与微管共同参与体外培养肝细胞胆小管网络的形成和维持。与对照组相比，实验组胆小管网络形成的更快，保持时间更长。 研究结论： 1、应用阳离子脂质体转染法可获得SSH1L在肝细胞内的稳定表达。 2、外源SSH1L转染体外培养大鼠肝细胞可诱导细胞内cofilin的去磷酸化。 3、转染SSH1L后改善了肝细胞的增殖水平。 4、体外培养肝细胞胆小管的形成依赖于邻近肝细胞膜的极性区域。 5、微丝和微管共同参与了胆小管网络的形成和维持，其形态和分布与其功能相适应。 6、cofilin去磷酸有利于体外培养肝细胞胆小管网络、细胞功能的维持，并且通过细胞骨架成分发挥作用。 7、体外通过转染SSH1L诱导cofilin的去磷酸化作用，并非由于SSH1L催化活性的增加而是由于SSH1L的过表达所致。SSH1L的过表达并未抑制SSH1L的催化活性。 8、通过诱导cofilin的脱磷酸化改善了肝细胞的存活状态，延长了存活时间，有效促进和维持了体外培养肝细胞的极性重建。