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土壤盐渍化严重影响植物的生长和发育,制约着当今农业生产发展。甜菜碱是现已发现的最好的渗透调节物质之一,在植物体内由胆碱经两步化学反应生成,胆碱-甜菜碱醛-甜菜碱。催化两步反应的分别是胆碱单加氧酶和甜菜碱醛脱氢酶。
本实验采用RT-PCR、RACE等方法从超旱生、耐盐植物梭梭(Haloxylon ammodendron)中扩增出甜菜碱合成过程中限速酶胆碱单加氧酶(CMO)编码基因的cDNA序列(命名为HaCMO)和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)编码基因的cDNA序列(命名为HaBADH)。HaCMO的cDNA全长为1424bp,包含一个完整的开放阅读框,长度为1344bp,推测其编码的氨基酸序列全长为447个氨基酸残基。HaBADH的cDNA全长为1522bp,包含一个完整的开放阅读框,长度为1503bp,推测其编码的氨基酸序列全长为500个氨基酸残基,并在257~266位包含醛脱氢酶所具有的高度保守的十肽序列(VTLELGGKSP)以及在第294位点上含有与酶功能有关的半胱氨酸残基(C)。HaCMO核苷酸序列与藜科几种盐生植物如菠菜(Spinacia oleracea)、山菠菜(Atriplex hortensis)、辽宁碱蓬(Suaeda liaotungensis)、盐角草(Salicornia europaea)和甜菜(Beta vulgaris)等的一致性均在74.5%以上,推导编码蛋白的氨基酸序列一致性均在73.5%以上,表明CMO基因在藜科植物中是一种较保守的基因。HaBADH核苷酸序列与藜科几种盐生植物如盐爪爪(Kalidium foliatum)、中亚滨藜(Atriplex centralasiatica)、三角叶滨藜(Atriplex triangularis)、菠菜、山菠菜和甜菜等的同源性均在85%以上,推导编码蛋白的氨基酸序列一致性均在87%以上,表明BADH基因在藜科植物中是一种非常保守的基因。
以获得的HaCMO和HaBADH完整开放阅读框为目的基因,构建重组植物表达载体pCAMBIA2300-HaCMO和pCAMBIA2300-HaBADH,通过农杆菌介导法成功导入水稻愈伤组织,并获得了转基因植株。研究结果为从分子水平探明梭梭的抗旱、耐盐机制,利用其抗逆基因对其他植物尤其是农作物进行转化奠定了基础。