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长链核酸适配体通常因多余的核苷酸序列会导致适配体性能下降而限制了其应用。在保留长链适配体结合域的基础上进行适当截短,有利于提高其亲和力和特异性,扩大应用范围。本研究对25羟基维生素D3和雌二醇原长适配体进行了序列截短,并利用截短适配体分别基于荧光法和纳米金比色法检测25羟基维生素D3和雌二醇。研究结果对适配体的应用和产业化发展具有积极的推动作用。本研究的主要内容和结论是:(1)维生素D缺乏与各种代谢疾病密切相关。25-羟基维生素D3作为维生素D水平的衡量指标,具有重要的检测意义。利用亲和力提高的截短适配体对25羟基维生素D3进行了高灵敏荧光检测,该方法基于PicoGreen染料嵌入适配体和互补链形成的双链DNA中产生的荧光强度变化进行检测。通过截取25羟基维生素D3原长适配体的小发夹环作为结合域并保留不同长度的双螺旋结构域,获得4条截短适配体。在优化参数条件下,对比了 4条截短适配体及原长适配体的亲和力和特异性,其中序列最短的适配体D3-4(21 mer)对25羟基维生素D3表现出最高的亲和力及特异性,检测限低达0.04μg/mL。D3-4截短适配体解决了原始的长链适配体不适用于该荧光方法对25羟基维生素D3检测的问题。本研究中亲和力得到提高的截短适配体在25羟基维生素D3检测中应用前景广阔。(2)雌二醇可通过食物链在人体内不断蓄积,从而对人体健康产生有害影响。为了确定雌二醇原始长链适配体(EO0)的结合域,本研究在截取EO0适配体碱基序列中不同位置的单个环或多个环组合基础上进行序列截短(包括发夹环、内部环、多环),并保留适当的双螺旋结构域。通过比较发现,15 mer的E09截短适配体具有提高的亲和力及特异性,说明E09截取的E00适配体中接近3’端的发夹环为雌二醇目标物的结合域。E09适配体用于雌二醇的纳米金比色检测,检测限为0.02μg/mL。经过简单的前处理,E09适配体传感器用于检测牛奶和矿泉水中的雌二醇。结果显示,本研究提出的截短适配体在雌二醇检测中具有很大的应用潜力,且本研究为其他长链适配体提供了截短参考。