目的评价采用VEGF启动子介导CD／TK双自杀基因重组腺病毒(Ad-VEGFp-CDgly TK)混合超液化碘油，经肝动脉靶向性栓塞，术后腹腔注射更昔洛韦(GCV)+5-氟胞嘧啶(5-FC)，综合治疗兔VX2肝移植癌的效果。材料与方法第一部分：VEGF启动子介导CD／TK双自杀基因重组腺病毒的构建。第二部分：兔VX2肝移植癌模型的建立。利用组织块法。第三部分：靶向性VEGF启动子介导CD／TK双自杀基因重组腺病毒混合超液化碘油综合治疗兔VX2肝移植癌的实施及其疗效的综合评价。实验分组：①经肝动脉注入生理盐水(NS组)、②超液化碘油(LP组)、③Ad-VEGFp-CDglyTK(Ad-VEGFp-CDglyTK组)和④Ad-VEGFp-CDglyTK与超液化碘油混合(Ad-VEGFp-CDglyTK+LP组)。基因治疗组术后腹腔注射GCV+5-FC。疗效评价：(1)确定肿瘤存在，观察肿瘤的生长状况对各组实验兔行MRI、SCT、DSA、US检查。(2)双自杀基因的转染RT-PCR法证实。(3)组织病理学的改变常规HE染色，光镜下观察。(4)免疫组织化学检测采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶法(SP法)：检测肿瘤组织抗VEGF、抗Ⅷ因子相关抗体表达。并予微血管密度(MVD)计数。(5)肿瘤组织细胞原位凋亡采用TUNEL法检测。(6)安全性监测抽血检测血常规，ALT，γ—GT，Cr，总胆固醇，甘油三脂等指标。(7)统计学分析。所有的数据采用均数±标准差的方式表示。肿瘤体积及MVD用方差分析、组间两两比较采用SNK-q检验；VEGF比较采用秩和检验。应用SPSS11.5软件包进行分析，以P＜0.05为有统计学意义。结果1、4组实验兔VX2肝肿瘤存在。术前肿瘤体积在统计学上无显著性差异(P＞0.05)；介入治疗后10天、15天的各组之间肿瘤增长率均有显著性差异(P＜0.05)，LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组肿瘤增长率最小，而LP组肿瘤增长率小于Ad-VEGFp-CDglyTK组，三个治疗组疗效均优于生理盐水对照组。2、兔VX2肝移植癌组织总RNA中CDglyTK双自杀基因转染成功。PCR反应结果显示：用扩增CD、TK基因引物进行的PCR反应，出现CD、TK基因特征性的DNA条带。其片段大小为：CD片段：1.3kb；TK片段：1.1kb。3、常规组织病理学改变提示：LP组及LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组肿瘤多为大面积坏死，肿瘤周边见一些残存的肿瘤组织。Ad-VEGFp-CDglyTK组与NS组肿瘤内可见斑片状坏死，周边可见转移灶。Ad-VEGFp-CDglyTK组与LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组肿瘤组织切片中可见片状坏死区，而且这些区域可见大量炎性细胞浸润。4、抗VEGF因子的表达：LP组最高，与其它三组相比有显著性差异(P＜0.05)，其它三组之间未见显著性差异。MVD表达：LP组最高，LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组最低，与其它各组相比有显著性差异(P＜0.05)，而Ad-VEGFp-CDglyTK组MVD表达也低于NS组，有显著性差异(P＜0.05)。5、肿瘤组织细胞原位凋亡提示：镜下可见细胞凋亡可大片发生。肝癌细胞均出现凋亡表现：细胞体积明显缩小，核呈蓝紫色，断裂为多个碎块状，核仁无，碎裂的核由膜包裹着，有者凸起于细胞表面，呈蓝紫色凋亡小体。LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组最高，与其它各组相比有显著性差异(P＜0.05)。6、存活期：LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组(53.0±3.0)d与其他组(46.0±2.5)d，(47.5±3.0)d相比有差异(P＜0.05)。7、血清AST、ALT、Cr水平及全血细胞计数：LP+Ad-VEGFp-CDglyTK组治疗前后变化与其他组相比无差异(P＞0.05)，与对照组相比有差异(P＜0.05)。4组验血结果未见显著性差异。8、治疗后实验兔重要脏器的组织学观察：为了解该综合疗法对荷瘤兔有无毒副作用，取治疗组荷瘤兔心、脑、肾等重要脏器行常规病理检查未见明显异常。结论1、经肝动脉介导方式，是Ad-VEGFp-CDglyTK混合超液化碘油治疗兔VX2肝移植癌理想的给药方法及途径。2、Ad-VEGFp-CDglyTK混合超液化碘油，经肝动脉靶向性栓塞，术后腹腔注射GCV+5-FC，对兔VX2肝移植癌有确切的杀伤作用。3、Ad-VEGFp-CDglyTK混合超液化碘油，经肝动脉靶向性栓塞，术后腹腔注射GCV+5-FC，与单纯超液化碘油栓塞以及单纯灌注Ad-VEGFp-CDglyTK、术后腹腔注射GCV+5-FC相比，对兔VX2肝移植癌有增强治疗效果的作用。4、Ad-VEGFp-CDglyTK混合超液化碘油，经肝动脉靶向性栓塞，术后腹腔注射GCV+5-FC，对兔VX2肝移植癌的治疗具有比较安全的优点。5、介入疗法可以为自杀基因药物治疗肝癌提供理想的给药方法及途径。6、双自杀基因与碘油混合使用，可以提高自杀基因在肿瘤组织内的转染选择性，可以克服传统化疗性栓塞远期效果不理想的缺点，增强治疗效果。7、该综合疗法可以作为治疗人类肝癌一种新型、可行而有效的方法。