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近视眼是全球发病率最高的眼病之一，但到目前为止还没有一种安全有效的近视防治药物。阿托品是唯一获得公认的有效药物，但由于其明显的副作用，临床上难以推广。近视的发生与眼轴延长和眼球扩大密切相关。近期的研究已经发现球内或者球周注射选择性M1受体拮抗剂哌仑西平（pirenzepine，以下简称PIR）能够明显抑制实验性近视的发生和发展，并且安全无毒；但是有创伤性的给药方式不利于长期用药。所以开发无创性的给药方式和制剂十分迫切。本课题对自行研发的哌仑西平滴眼剂的药品质量、药物疗效和治疗机制等方面进行研究，为哌仑西平滴眼剂的临床使用提供实验依据和参考。第一部分【目的】考察哌仑西平滴眼剂的杂质含量、药物稳定性和眼部耐受性。【方法】抽取三个批号的2％哌仑西平滴眼剂，使用高效液相色谱法测定其中的杂质含量。另抽取三个批号的2％哌仑西平滴眼剂，分别进行40℃加速实验和25℃室温长期留置实验，考察哌仑西平滴眼剂的放置稳定性。眼部刺激性试验取新西兰白兔，随机分成四组，实验眼分别给予1％，2％，4％和8％PIR滴眼液点眼，对照眼给予0.9％氯化钠溶液点眼。根据药物试验要求分别观察不同给药周期后双眼的眼睑、结膜、角膜和虹膜情况，根据Draize评分表的标准打分。实验结束后摘除眼球作组织切片，光镜检查。致敏性试验取豚鼠先行背部脱毛，而后将受试药物（2％PIR）、赋形剂和阳性对照药物（2，4—二硝基氯代苯）涂于脱毛区并给予适当固定，在规定时间内观察受试区皮肤的水肿和红斑情况并进行评分。毒性实验取连续用药（分别给予2％PIR或0.9％氯化钠溶液）四周后的动物眼球，进行病理检查。所有试验均使用盲法。【结果】所检测的2％哌仑西平滴眼剂的杂质含量符合标准。2％哌仑西平滴眼剂的加速稳定性实验合格；长期稳定性实验结果表明，2％哌仑西平在常温下放置超过6个月出现溶液变色等稳定性下降的表现。刺激性试验结果表明，1％和2％PIR溶液的刺激性较小，眼部耐受性较好；4％和8％PIR溶液的重复和长期给药刺激性较大，耐受性差。致敏性实验结果表明，PIR滴眼剂为弱致敏性。病理检查显示，2％PIR滴眼剂对眼部各个组织没有明显的毒性反应。【结论】2％哌仑西平滴眼剂的药品标示含量、杂质含量等指标均符合标准；建议常温、常湿下保存时间不超过6个月。1％和2％哌仑西平滴眼剂的眼部刺激性小，耐受性较好；2％哌仑西平滴眼剂致敏性低，对眼部组织没有明显的毒性作用。第二部分【目的】研究哌仑西平滴眼剂能否抑制豚鼠形觉剥夺性近视眼的进展；并探讨哌仑西平对M1和M4亚型乙酰胆碱受体表达的影响。【方法】药效学研究选取三周龄豚鼠66只，右眼眼睑缝合建立形觉剥夺性近视模型。建模动物随机分为六组：其中三组分别给予1％、2％和4％PIR滴眼；一组给予1％阿托品溶液滴眼，作为阳性对照；一组给予0.9％氯化钠溶液滴眼，作为阴性对照；一组不给任何药物，作为空白对照。通过形觉剥夺眼的屈光度数变化、眼轴长度以及眼球湿重评价哌仑西平的治疗效果。另取三周龄豚鼠32只，随机分为4组，其中两组单眼眼睑缝合建立形觉剥夺性近视模型，另两组双眼均开放。一组形觉剥夺组和一组双眼开放组，给予哌仑西平0.1ml球周注射（含盐酸哌仑西平5mg），每天一次，连续两周；另一组形觉剥夺组和双眼开放组，均给予0.9％生理盐水0.1ml球周注射，注射频率与哌仑西平组相同。实验结束后，通过RT—PCR对各组巩膜、脉络膜和视网膜内M1和M4亚型受体的mRNA水平进行检测，同时使用免疫荧光法检测两种受体在各个组织中的表达情况。【结果】（1）右眼遮盖四周后，未处理组和0.9％氯化钠溶液滴眼组动物的遮盖眼分别平均诱导出-2.31D和-2.25D相对近视。1％、2％和4％哌仑西平溶液滴眼组的遮盖眼分别出现-1.63D、-0.89D和-0.70D相对近视，1％阿托品溶液滴眼组的遮盖眼出现-0.31D相对近视。与1％阿托品滴眼组相比，2％哌仑西平滴眼组和4％哌仑西平滴眼组在实验前后遮盖眼的屈光度变化没有显著统计学差异，但是另外三组在实验前后遮盖眼的屈光度变化均有显著统计学意义（F=9.56，P＜0.05）。实验眼经遮盖4周后，未处理组、0.9％氯化钠溶液滴眼组和1％哌仑西平溶液滴眼组的玻璃体腔深度及眼轴长度较实验前明显延长，分别为0.057±0.056mm，0.064±0.053mm和0.033±0.035mm，差异有统计学意义（P＜0.05）。遮盖四周后，未处理组和0.9％氯化钠溶液滴眼组的眼球湿重明显高于其他组。（2）四个组别的视网膜色素上皮层、脉络膜毛细血管内皮细胞和巩膜，与M1受体的抗体均呈不同程度的阳性反应；内核层和视网膜神经节细胞层染色呈弱阳性。然而，MD—S组的视网膜、脉络膜和巩膜的M1受体表达水平均明显高于其他三组（F=9.005，7.26，10.43，P均＜0.05）。单眼形觉剥夺组的脉络膜和视网膜内M1受体的mRNA水平显著高于双眼开放的两组（F值分别为6.23和7.23，P均＜0.05）。MD—S组巩膜内的M1受体mRNA水平明显高于其他三组（F=7.97，P＜0.05）。四个组别中，脉络膜毛细血管内皮细胞和巩膜的M4受体的染色结果均呈阳性；但是MD—P组视网膜组织的平均荧光强度显著弱于其他三组（F=5.156，P＜0.05）。MD—P组巩膜和视网膜内的M4受体mRNA水平显著低于其他三组（F=12.33，4.02，P均＜0.05）【结论】2％和4％哌仑西平滴眼液能够有效抑制豚鼠形觉剥夺性近视的发展，2％是比较理想的制剂浓度。在豚鼠形觉剥夺性近视模型中，M1受体的表达水平上调，且升高幅度远高于M4受体。哌仑西平通过阻断M1受体，阻滞豚鼠实验性近视的进展；M4受体的表达改变可能源于哌仑西平的继发作用。