基于反相高效液相的方法研究心衰心阳虚证患者血浆氨基酸指纹图谱

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背景心力衰竭(Heart Failure, HF)也称充血性心力衰竭,是由心肌炎、冠心病、高血压病等病因使心功能减退、心排血量下降而出现的一种复杂的临床综合征,是大多数心血管疾病的最终归宿,也是最主要的死亡原因。心衰严重影响着患者的生活质量和寿命,且医疗费用高,给家庭、社会造成了沉重的医疗负担,因此心衰的防治一直是现代医学界中的研究热点。近年来,随着中医药现代化研究逐渐成为焦点问题,学者们力图用现代科学方法论来衡量中医,而中医证型的量化、中医辨证的标准化则为热点之一。目的探讨应用反相高效液相色谱(Reversed-phase High performance Liquid Chromatography, RP-HPLC)的方法研究心衰心阳虚证患者血浆中氨基酸如缬氨酸(Valine, Val),苯丙氨酸(Phenylalanine, Phe)、异亮氨酸(Isoleucine, Ile)、亮氨酸(Leucine, Leu)、半胱氨酸(Cysteine, Cys)的图谱特点,以及此证型患者的B-型尿钠肽(B-type natriuretic peptide, BNP)、二氧化碳分压(Partial Pressure of Carbon Dioxide, PaCO2)、氧分压(Partial Pressure of Oxygen, PaO2)、射血分数(Ejection Fractions, EF),A峰E峰流速比值(E/A)等指标水平的特点。方法本研究为横断面研究,自2009年12月到2010年4月,从广东省中医院门诊、急诊、留观、综合病区、心血管内科选取28例心衰证型为心阳虚型的病人。纳入后行相关理化检查,并留取受试者血液样本并使用RP-HPLC法得出受试者血浆氨基酸的图谱,观察其特点,并寻找患者的图谱指标、BNP与心阳虚证候积分的相关性。结果纳入的28例心衰心阳虚患者中,有1名患者症状较重,处于昏迷状态,无法对其进行中医证候评分,故剔除,共观察心衰心阳虚患者27例(男9例,女18例,男女间各项一般资料无统计显著性差异)。患者心阳虚证候积分与氧分压(80.22±33.40mmHg)、二氧化碳分压(37.45±15.55mmHg)、射血分数(45.18±19.20%),A峰E峰流速比值无明显关系(r≈0);但有随BNP水平增加而增加的且呈直线的趋势。回归方程为Y=15.169 +0.000864XBNP (P<0.05)在固定的色谱条件下以RP—HPLC法检测27例心衰心阳虚患者的血浆,得出氨基酸代谢指纹图谱。缬氨酸(Val)、苯丙氨酸(Phe)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)在20min内得到分离,半胱氨酸(Cys)因含量极低检测不到。血浆中的内源性物质不干扰测定。分别以峰面积为自变量,心阳虚证候积分为应变量作散点图,可见心阳虚证积分有随缬氨酸和亮氨酸峰面积增加而减少,随苯丙氨酸及异亮氨酸增加面减少的趋势,但只有苯丙氨酸具有统计学意义(P<0.05,Y=12.112+0.0000254Xphe),余3种氨基酸与心阳虚证积分的线性关系在统计学上不成立。结论基于反相高效液相的方法测定氨基酸的代谢指纹图谱,具有选择性高、分析速度快和灵敏度高等优点。因血浆中半胱氨酸含量极低,未能够识别,需进一步深入研究其原因。其余4种氨基酸中苯丙氨酸与心阳虚证候积分存在明确的直线关系;心阳虚证候积分与缬氨酸、亮氨酸存在正相关的趋势,与异亮氨酸存在负性相关的趋势。在此研究基础上,氨基酸代谢指纹图谱有望可用于找出心衰心阳虚患者的证候特点。
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