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本论文包含三个试验,主要研究了饲料中添加β-1,3-葡聚糖(β-1,3-Glucan)对凡纳对虾生长和体内四种免疫酶(酚氧化酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶)活性动态变化的影响。
试验一:在基础料中添加0、100、200、400、600和800 mg/kg(分别记做G0、G100、G200、G400、G600、G800组)的β-1,3-葡聚糖,对平均体重为0.55±0.01g的凡纳对虾进行5周的饲养试验,研究β-葡聚糖对其存活率、特定生长率和饲料效率的影响。每个饲料组设4个重复,每个重复30尾虾。试验结束时,各组对虾的存活率相似;随着饲料中β-葡聚糖添加量的增加,对虾的特定生长率呈现先升高后降低的趋势,其中400mg/kg组最高,比对照组升高7.0%,但差异不显著(P>0.05);400 mg/kg组的饲料效率最高,显著高于对照组和800 mg/kg组(P<0.05)。二次回归分析,得到特定生长率y(%)与β-葡聚糖添加量x(mg/kg)的关系为y=-2E-06x<2>+0.0014x+3.2905,R<2>=0.9385,分析得到凡纳对虾饲料中β-葡聚糖的最适添加量为336.5 mg/kg。
试验二:设计6个剂量组,分别在基础饲料中添加0、100、200、400、600和800 mg/kg(分别记做G0、G100、G200、G400、G600、G800组)的β-1,3-葡聚糖,对平均体重为1.05±0.05g的凡纳对虾进行5周的饲养试验,试验中分别在第0、7、14、21、28和35天时取样测定血清中酚氧化酶(PO)、肝胰腺中超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性。同时在试验进行第21天和35天时,通过肌肉注射白斑综合症病毒(WSSV)进行攻毒,测定各组凡纳对虾5天和13天内的累计死亡率和免疫保护率。
结果表明,饲料中添加一定剂量的β-葡聚糖,可以显著提高PO、SOD、ACP和AKP的活性,并可以维持一定的时间,其中对PO和SOD的促进作用最明显。四种免疫酶的活性变化随摄食β-葡聚糖的时间和剂量呈现不同的变化趋势。其中,PO和SOD活性均随摄食时间延长呈现先升高后降低的变化趋势,不同添加量组的变化情况相似,但从对酶活性的促进作用和维持时间比较分析,400和200 mg kg<-1>组分别对PO和SOD的作用效果最明显;不同剂量组对虾ACP活性均在第14天时达到最高值,而AKP活性在第14天时显著升高后降低,第35天时又回复到第14天时的水平。攻毒结果显示,21天时G400、G600和G800组对虾的累计死亡率显著低于对照组,其中G600组的相对免疫保护率最高,为68.42%;35天时,G200和G400组的累计死亡率显著低于对照组和其他各试验组,其中G200组的相对免疫保护率最高,为59.03%。由此说明:短期连续投喂β-1,3-葡聚糖,高剂量组可以显著增强对虾的抗病力、延缓其病毒感染后的死亡时间:长期连续投喂,中剂量组可以显著增强对虾抗WSSV的能力。
试验三:在前期工作的基础上,本试验在基础饲料中添加浓度为336.5 mg/kg的β-1,3-葡聚糖,采用6种不同的方案投喂凡纳对虾,分别为:连续投喂基础料、7天试验料+28天基础料、14天试验料+28天基础料、21天试验料+28天基础料、28天试验料+28天基础料和35天试验料+28天基础料,分别记为对照组、7天组、14天组、21天组、28天组和35天组。
以血清PO、SOD、AKP和ACP以及肝胰腺中ACP和AKP活力变化为评价指标,在各组停饲β-葡聚糖后的第0、7、14、21、28和35天分别取样进行测定,以研究不同投喂方案下凡纳对虾免疫酶活性随停饲β-葡聚糖时间的动态变化。同时分别在停饲β-1,3-葡聚糖后的第0、14天和28天用WSSV攻毒,测定7天内的累计死亡率。试验结果表明,停止投喂β-葡聚糖后,凡纳对虾血清SOD活性没有显著变化,血清PO、ACP和AKP活性以及肝胰腺ACP和AKP活性均显著降低,其变化趋势与摄食β-1,3-葡聚糖的时间有关,其中连续投喂14天后停饲的凡纳对虾四种酶的活性在较长时间内维持在相对较高的水平。连续摄食β-葡聚糖14天后停饲的凡纳对虾呈现最高的免疫保护率,停饲后第28天相对免疫保护率达77.01%。