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蚕蛹蛋白是一种优质的天然蛋白,其经蛋白酶酶解后的水解产物更是具有降血压、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤等诸多功效,有着广阔的市场发展前景。采用柱前衍生化-高效液相色谱法测定蚕蛹蛋白、蚕蛹蛋白中性蛋白酶水解液5 kDa以上组分SN1及蚕蛹蛋白中性蛋白酶水解液5 kDa以下组分SN2氨基酸含量,并同时测定血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性。结果表明:3种组分中氨基酸的种类齐全,且必需氨基酸与18种氨基酸的配比含量均符合WHO/FAO(世界卫生组织/联合国粮食及农业组织)所提出的参考蛋白模式,且SN2中对ACE抑制活性有影响的疏水性氨基含量为49.15%,SN1中的40.55%及蚕蛹蛋白中的45.21%,其中对ACE抑制活性影响较大的脯氨酸、芳香族氨基酸含量为7.75%和19.20%,高于SN1中的5.62%和13.59%及蚕蛹蛋白中的7.42%和15.81%,并且SN2的ACE抑制率为47.6%显著高于SN1和蚕蛹蛋白中的抑制率(样品浓度0.20 mg·mL-1),表明水解后疏水性氨基酸组成的改变与ACE抑制活性的变化趋势相同,且ACE抑制活性主要集中于SN2。以SN2组分为原料进行离子交换层析分离实验,综合考察了静态吸附及动态吸附实验效果后确定了 SN2组分的分离条件:湿重6 g的D201树脂,浓度为0.01 moL.L-1的磷酸平衡缓冲液(PH 8.5),NaCl洗脱液梯度洗脱浓度为0～1.0 moL·L-1,SN2上样量200 mg,上样流速、平衡液流速、洗脱流速均为1.0 mL.min-1。在此分离条件下,得到ACE抑制活性主要集中于穿透峰组分IE1中,其在0.008 mg.mL-1的样品浓度下ACE抑制率达到54.91%,有着显著的降血压效果。以穿透峰组分IE1为原料进行凝胶层析分离实验,通过对分离条件的一系列考察,确定了最终的凝胶分离条件:凝胶类型为葡聚糖凝胶Sephadex G-15、柱规格为20×500 mm的层析柱、洗脱剂为去离子水、洗脱流速1.0 mL·min-1、上样量17.36 mg。在该分离条件下将洗脱组分分为GF1、GF2、GF3三个组分,其中ACE抑制活性主要集中于GF2组分,其在0.008 mg·mL-1样品浓度下具有69.28%的ACE抑制率,抑制效果较为显著。且GF1、GF2、GF3组分分子量测定结果表明各组分中多肽的分布不同,达到了分离的目的。以GF2组分为原料进行反相高效液相色谱分离实验,经过对色谱分离条件的优化,确定了分离GF2组分的分析色谱条件及制备色谱条件。GF2组分经第一次液相分离后得到了最高活性组分HP6,其在样品浓度0.006 mg·mL-1时ACE抑制率达到了 76.27%;将HP6组分进行第二次液相分离得到了最高活性组分HP64,并经高效液相色谱分析及高效毛细管电泳分析可确定为单一组分,其IC50值为0.0013 mg·mL-1。HP64具有显著的ACE抑制效果,达到了分离纯化降血压肽的目的。