布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌（Brucella）引起的人畜共患病。布鲁氏菌的宿主范围主要包括家畜、家禽、野生动物以及人，能够引起发热、流产与不育、慢性关节炎和神经损害等症状。世界上多个国家和地区有布鲁氏菌病的存在，造成了巨大的经济损失。因此，布鲁氏菌病的预防工作是非常重要的，采用疫苗接种的方式是防治布鲁氏菌病的重要方法。本研究中，以B. melitensis强毒株M28为模板，PCR分别扩增SOD、L7/L12、OMP25、OMP31基因，产物经回收纯化、EcoRⅠ和BglⅡ双酶切后，克隆至pCAGG质粒中，构建真核表达质粒pCAGG-SOD、pCAGG-L7/L12、pCAGG-OMP25、pCAGG-OMP31。然后，将B.melitensis强毒株M28的SOD和OMP25基因经PCR扩增，克隆至pET-32a质粒的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点，构建重组表达质粒pET-SOD和pET-OMP25。pET-SOD和pET-OMP25质粒分别在BL21（DE3）感受态细胞中经IPTG诱导表达，镍琼脂糖凝胶亲和层析分离重组SOD蛋白（rSOD）和重组OMP25蛋白（rOMP25）。小鼠免疫实验中，用上述四种质粒pCAGG-SOD、pCAGG-L7/L12、pCAGG-OMP25、pCAGG-OMP31（DNA组）联合免疫BALB/c小鼠，同时设置弱毒疫苗M5-90组、PBS组、pCAGG组作为三组对照。通过利用间接ELISA实验的方法，对免疫小鼠血清中特异性抗体水平进行检测；进而，通过利用酶联免疫斑点实验（ELISPOT）和流式细胞术（FCM）的实验方法，对免疫小鼠的细胞免疫水平进行检测。本研究结果显示，rSOD和rOMP25蛋白分子量分别为34ku和43ku；间接ELISA结果表明DNA组特异性IgG抗体水平显著高于M5-90组（p<0.05）；ELISPOT结果表明DNA组分泌IFN-γ的细胞数目显著高于M5-90组；FCM结果表明DNA疫苗和M5-90免疫小鼠能够引起小鼠CD4+T和CD8+T细胞含量升高，DNA组小鼠CD4+T和CD8+T细胞含量升高更明显。综上，编码布鲁氏菌SOD、L7/L12、OMP25、OMP31基因的DNA疫苗能够诱导小鼠产生特异性体液免疫反应和细胞免疫反应，此DNA疫苗有望作为预防布鲁氏菌病的候选疫苗。