论文部分内容阅读
目的：（1）通过构建绿色荧光蛋白标记的Ng过表达载体转染HEK293T细胞来研究Ng的基本功能。（2）通过构建和包装含有目的基因Ng的慢病毒感染Jurkat细胞来研究Ng对T淋巴细胞功能的影响，进而揭示神经颗粒素在系统性红斑狼疮病人中的致病机制。 方法：（1）用分子克隆技术构建绿色荧光蛋白标记的Ng真核表达质粒pcDNA3.1(+)-GFP-Ng，并转染HEK293T细胞，用western blot证实目的基因的表达、用IF明确目的基因的细胞定位、用流式细胞仪检测细胞凋亡、CCK8检测细胞增殖。（2）构建和包装表达Ng的慢病毒，感染Jurkat细胞，用western blot证实目的基因的表达、IF明确目的基因的细胞定位、流式细胞仪和DNA Ladder检测细胞凋亡、CCK8检测细胞增殖、ELISA检测细胞因子IL-2和IFN-γ的表达水平、qPCR检测Ng、CaMKII和CaMKIV mRNA水平的表达。 结果：（1）本课题构建了表达Ng的真核表达质粒，转染到HEK293T细胞，明确了Ng的表达和胞浆定位。（2）用表达Ng的慢病毒感染Jurkat细胞，发现Ng促进了Jurkat细胞的凋亡，CaMKIV转录水平明显下降。 结论： Ng促进Jurkat细胞凋亡，降低CaMKIVmRNA水平的表达，因此可能促进了系统性红斑狼疮病人外周血中T淋巴细胞的凋亡，加速疾病的发生发展。