目的：构建滴度1×10¹²vg/mL的rAAV9-hSERCA2a-EGFP病毒载体系统，研究不同心脏基因转染方法转染AAV9-SERCA2a基因对SD大鼠心肌的持效性及对机体安全性的影响。方法：根据细菌内同源重组的方法将hSERCA2a基因克隆到腺相关病毒载体中，与其包装质粒pAAV pHelper发生重组，通过脂质体共转染人胚肾293（HEK293）细胞，酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后进行扩增、纯化和滴度测定。110只雄性SD大鼠随机分为尾静脉注射（Tail vein injection，TVI）组、心肌注射（Intramyocardialinjection，IMI）组、心包腔注射（Intrapericardial injection，IPI）组，三组采用相应方法在体分别转染滴度1×10¹¹vg/mL AAV9-SERCA2a-EGFP、AAV9-EGFP、NS各200μL，其中，TVI组根据转染病毒滴度不同又分为NS组、低剂量组（1×10⁹vg/mL）、高剂量组(1×10¹¹vg/mL)，各组分别转染相应滴度AAV9-SERCA2a-EGFP、AAV9-EGFP200μL。转染28d荧光显微镜下观察心肝肾组织绿色荧光表达情况，Western Blot技术检测SERCA2a基因在大鼠各组织的相对表达量，体表12导联心电图检测心律失常发生率，HE染色观察病理学变化，心脏彩色多普勒超声评价心功能，血液生化学指标检测肝肾功能。结果：1)酶切鉴定和DNA测序鉴定证明rAAV9-hSERCA2a-EGFP构建成功，滴度高达1×10¹²vg/ml。2)三组左心室可见大量绿色荧光表达，IMI组荧光局限在注射点，三组肝肾组织均可见微弱荧光；三组心肌SERCA2a蛋白相对表达量显著高于肝肾（P<0.01），TVI组和IMI组心肌SERCA2a蛋白相对表达量明显高于IPI组（P<0.01）；TVI组和IPI组心电图正常，IMI组2只大鼠发生室性早搏；三组转染AAV9-EGFP、AAV9-SERCA2a-EGFP与转染NS相比，心功能、组织病理学、血液生化学指标均无显著差异（P>0.05）。3)TVI法高剂量组心肌绿色荧光明显高于低剂量组，高剂量组心肌SERCA2a蛋白相对表达量显著高于低剂量组（P<0.05）；低、高剂量组转染AAV9-EGFP、AAV9-SERCA2a-EGFP与NS对照组相比，心律失常发生率、心功能、组织病理学、血液生化学指标差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：1)成功构建和包装滴度1×10¹²vg/mL的rAAV9-hSERCA2a-EGFP。2)三种方法转染滴度1×10¹¹vg/mL AAV9-SERCA2a基因4周，TVI法的持效性和安全性优于IMI法和IPI法。3)TVI法转染滴度1×10¹¹vg/ml的AAV9-SERCA2a基因200μl的持效性和安全性优于滴度1×10⁹vg/ml。