前言 肺间质纤维化是多种疾病造成的肺部胶原沉积增多。其发病机制复杂，治疗效果较差。生理状态下，AT-Ⅱ主要在肺内形成，目前源于其他器官的证据证明AT-Ⅱ可以刺激成纤维细胞增殖并合成胶原增多，这种作用是其1型受体介导的复杂细胞内信号传导所引发的。本实验是检验肺纤维化模型中肺泡灌洗液里AT-Ⅱ水平是否升高。 实验材料 博来霉素A₅ 生理盐水 氯胺酮 PBS AT-Ⅱ检测试剂盒 雄性Wistar大鼠 注射器 手术器械 细胞计数板 显微镜 离心机 高速低温离心机 干燥机 显微照相机 实验方法1 .wis讯r大鼠约2（）0克共40只.查表法随机分配为博来霉素给药1天组，3天组，7天组，14天组，28天组和相应对照组。氯胺酮腹腔内注射麻醉后，气管内注射博来霉素（smg/kg，溶于生理盐水0.2一0.3川中）。术后待大鼠体力恢复后，单笼饲养。分别于给药后1天，3天，7天，14天，28天处死相应的大鼠及对照组大鼠。术中用肝素生理盐水冲洗肺脏至发白。灌洗右肺共收集约2 oml灌洗液，显微镜下计数细胞，高速低温离心机制备灌洗液上清，留右肺备用。2.AT一11检测试剂盒由北方生物技术研究所提供，按说明使用。3.肺泡灌洗液（BALF）中细胞计数和细胞分类计数 在NeubaLler记数台上记数灌洗液细胞总数，以1*1 03/表示。余液在4 OC，飞2的转/分状态下离心10分钟。离心沉淀细胞用生理盐水冲洗并调整细胞数为1*1 06/毫升，取5 oul，用特制的玻片4℃，1 200转/分离心5分钟，使细胞直接均匀的平铺于载玻片上，冷风吹千。玻片置无水乙醇中固定，HE染色后记数细胞。 4 .HE染色 细胞涂片经苏木素染色，70%盐酸酒精分化，流水冲洗，伊红染色，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜下观察并摄像。了 实验结果1.肺泡灌洗液中细咆.总数在给药后逐渐增加，于第3天达到最高峰值，随后逐渐下降，至28天时细胞总数降到最低点。分类计数中:肺泡巨噬细胞数值于给药后逐渐下降，3天时下降到最低点，随后数值逐渐地上升，到28天时基本可以恢复到给药前的水平。灌洗液中性粒细胞数值的变化正好和巨噬细胞的变化相反，其数值在给药后第l天即开始增加，到第3天的时达数值高峰，后急速下降，第7天以后下降的趋势减缓，至28天时可基本恢复正常。淋巴细胞记数曲线似中性粒细胞，但到2S天时其数值仍然不能恢复到对照组水平。嗜酸细胞计数呈双峰变化，分别于给药后7天和28天达峰，但是第一峰高于第二峰。以上结果与文献报道给果相似。2.各组大鼠肺病理切片（见图）3.肺泡灌洗液中AT一n水平测定结果:各个给药组与对照组的比较分析见表呈，结果是各组与对照组间均无显著统计学差异。给药组间两两比较亦显示各组间无显著统计学差异。 讨论 目前多篇文献证明AT一订通过A几受体引起成纤维细胞增殖及合成胶原增多，如果给予血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）或ATI受体拮抗剂（ARB）类药物可减轻肺纤维化。本实验R虹.F中细胞计数及其动态变化符合文献报道，并且有病理证据充分证明模型制作成功。BALF中Al’- 11水平检测证明各组间AT-H水平无显著差异。这样的结果和Marsllall等实验结论相悖。 分析原因可能如下:本实验己经证实肺泡内炎症细胞增多。增多的炎症细胞有可能释放大量的蛋白酶，从而水解AT龙使肺泡内该物质水平降低。但该假设并没有实验的证实，仅是从理论上推测有这种可能，需进一步实验证实。 纤维化是发生在肺脏间质，结合本实验中肺泡中盯一2水平没有升高，故可能肺脏内AT一2水平升高主要发生在肺脏间质或者是血液循环中。 该实验的样本较小，故其检验效力大大的减弱。实验中采用放射免疫原理检测AT一2水平，因为它的测量数值差异很大，亦减弱了该实验的检验效力。 结论 本文首次证明Bleo致肺纤维化模型的肺泡灌洗液中AT-2水平没有升高:但是因为其样卞量较小和采用的测定技术缺陷，故应该进一步增加样本量并且采取更加准确地测量方法来重复试验。如果能结合血液和肺间质中AT龙水平的钡}!定及观察纤维化肺成纤维细胞对AT一2的反应贝J更能说明问题。