论文部分内容阅读
鳗弧菌(Vibrio anguillarun)是一种危害鱼类的重要的条件性病原菌,在世界各地流行,也是我国鲈鱼、牙鲆、大菱鲆等海水养殖动物的重要的病原菌,常给水产养殖业造成较大的危害。鳗弧菌外膜蛋白在其致病过程中也起着十分重要的作用,如细菌侵袭、粘附、毒素的分泌、铁的摄取、抗生素抗性等方面。本文对山东沿海分离的致病性鳗弧菌主要外膜蛋白进行了以下方面的研究:制备了鳗弧菌CW1、CW3、CW4、CW5、CW6和TL01的抗血清,与鳗弧菌不同血清型的标准菌株进行的微量凝集试验表明,鳗弧菌CW1、CW3、CW5、CW6属于O1血清型, TL01属于O2血清型,而CW4属于O3血清型。用Sarkosyl法提取分离了6株致病性鳗弧菌和8株不同血清型鳗弧菌标准菌株主要外膜蛋白,用SDS-PAGE电泳分析了其主要外膜蛋白的特征,不同菌株外膜蛋白的SDS-PAGE图谱各不相同,但主要外膜蛋白分子量都集中在19 kDa-83 kDa之间,各菌株含有共同的主要外膜蛋白条带,分子量分别为24 kDa, 38 kDa, 42 kDa和47 kDa,这4个蛋白组分占外膜蛋白总量的90%以上。用兔抗鳗弧菌CW1抗血清对6株鳗弧菌外膜蛋白进行Western-blotting分析表明,6株鳗弧菌含有共同的抗原,它们的分子量分别为24 kDa,38 kDa, 42 kDa和47 kDa,其中24 kDa外膜蛋白与抗鳗弧菌CW1抗血清反应最强烈,分子量大于47 kDa的外膜蛋白与抗CW1抗血清反应很弱。研究了不同培养温度对鳗弧菌外膜蛋白表达的影响,当鳗弧菌在37℃培养时,19 kDa外膜蛋白表达量明显增加,其占总蛋白的量从28℃时的3%升高到40%,而42 kDa和47 kDa外膜蛋白表达量下降;在15℃培养时,83 kDa外膜蛋白表达量明显增加。Western-blotting分析表明,细菌在15℃和37℃培养时的外膜蛋白抗原性反应发生变化,其中24 kDa和38 kDa外膜蛋白与鳗弧菌抗血清的反应明显减弱。研究了4种不同类型的抗生素对鳗弧菌主要外膜蛋白表达的影响,结果表明氨苄青霉素、强力霉素和磺胺嘧啶能明显抑制鳗弧菌42 kDa主要外膜蛋白的表达,随着抗生素浓度的增加,该外膜蛋白的表达量逐渐减少甚至消失,而庆大霉素对其表达没有明显影响,该42 kDa主要外膜蛋白的N末端序列为EAPTAINS,